利用原生质体融合技术构建耐酸絮凝性产乙醇酿酒酵母

为获得具有多种优良性状的高效乙醇生产菌株，以絮凝性酿酒酵母 RHZ-1及耐酸耐温酿酒酵母 SEB2为亲本，通过紫外诱变获得营养缺陷型标记菌株，并利用原生质体融合技术选育耐酸絮凝性酿酒酵母。通过对融合子的筛选获得一株优秀的耐酸絮凝性酿酒酵母菌株 RS-1；该菌株在30℃，pH2.2，15% YPD 条件下发酵24 h，乙醇产生量为47.87 g/L，糖消耗速率和基于糖消耗的乙醇收率分别比亲本菌株 RHZ-1提高了19.5%和9.8%。在35℃，pH2.2，15% YPD 条件下发酵48 h，乙醇产生量为38 g/L，糖消耗速率和乙醇收率分别比亲本菌株 RHZ-1提高了46.8%和21.6%。结果表明，获得的菌株可为提高燃料乙醇的生产效率奠定基础。
本试验探讨了常用饲料在瘤胃的降解特性及非降解饲料的小肠消化率,旨在为研究反刍动物的营养平衡和消化规律及科学配制日粮提供依据.试验选用3头装瘤胃瘘管和十二指肠瘘管的肉牛,采用尼龙袋法研究反刍动物常用饲料粗蛋白质和氨基酸瘤胃降解参数和表观小肠消化率.结果表明,在本试验中粗蛋白质降解率由低到高的顺序为:酒糟蛋白、黄玉米、羊草、玉米胚芽饼、菜粕、棉粕、豆粕、花生饼、啤酒糟、苜蓿、米糠、小麦麸;总氨基酸瘤胃降解率由低至高的顺序依次为:酒糟蛋白、黄玉米、羊草、玉米胚芽饼、菜粕、豆粕、棉粕、啤酒糟、花生饼、苜蓿、米糠、小麦麸.除花生饼、酒糟蛋白和黄玉米外,粗蛋白质和总氨基酸的有效降解率差异不显著(P＞0.05).粗蛋白质的表观小肠消化率由低至高的顺序依次为:苜蓿、羊草、米糠、小麦麸、啤酒糟、玉米胚芽饼、棉粕、菜粕、玉米、酒糟蛋白、花生饼、豆粕;总氨基酸的小肠消化率由低至高的顺序依次为:羊草、苜蓿、米糠、小麦麸、啤酒糟、玉米胚芽饼、菜粕、棉粕、花生饼、玉米、酒糟蛋白、豆粕.由此可见,不同的饲料瘤胃降解特性是不同的,并且为小肠提供的各种可吸收氨基酸潜力也是不同的.
γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH Ⅰ)是合成谷胱甘肽的关键酶.通过构建GSH Ⅰ活性较高的重组菌来提高合成GSH的能力.利用PCR技术扩增获得了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)2-10515的gshⅠ基因,构建原核表达载体pET-28a-gshⅠ,转化到Escherichia coli BL21(DE3)中,重组菌经诱导表达后,测得GSH Ⅰ的酶活力为46.09U/mg湿菌,活性较高.进一步利用生物信息学方法分析和预测GSH Ⅰ基因的序列和蛋白结构,为在基因水平上提高该酶的表达量和活性提供了理论依据.
[目的]肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins,PGRP)作为一个重要的模式识别受体,在家蚕Bombyx mori的先天免疫中发挥重要的作用.本研究主要探讨家蚕PGRP-L1基因的功能及其所参与的免疫信号通路.[方法]本实验通过RT-PCR扩增获得家蚕PGRP-L1基因.利用微生物诱导实验对5龄起蚕分别注射大肠杆菌Escherichia coli、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和PBS,12 h后取体壁和头部提取RNA,然后采用RT-PCR和凝胶电泳技术测定BmPGRP-L1基因的表达水平;利用RNA干涉实验向5龄起蚕注射PGRP-L1 dsRNA或PBS,6h后再分别注射3种灭活的微生物或PBS,然后检测家蚕体壁及头部的免疫相关转录因子(Rel,Cactus和Relish)以及家蚕多个抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)基因(攻击素基因Attacin,Moricin和葛佬素基因Gloverin)的表达情况.[结果]微生物诱导实验显示,注射大肠杆菌的实验组比注射PBS的对照组BmPGRP-L1基因转录水平显著上调,而注射酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的实验组BmPGRP-L1转录水平没有变化.利用RNAi技术成功敲低BmPGRP-1表达,对BmPGRP-L1敲低的5龄起蚕注射灭活的微生物,敲低实验组relish因子表达低于正常对照组,相应地抗菌肽基因的表达也有不同程度的下调.[结论]结果提示,BmPGRP-L1基因参与家蚕对革兰氏阴性菌大肠杆菌的免疫响应;BmPGRP-L1基因在家蚕的体壁和头中参与Imd信号通路.
简单回顾了五十年来珀金埃尔默公司在气相色谱技术发展方面的贡献,并介绍了其色谱线产品-气相色谱仪、气质联用仪、自动顶空进样器在食品安全检测方面的应用特点,包括:农残检测,丙烯酰胺分析,啤酒、饮料中风味组分质量控制等.
啤酒在生产过程中很容易染菌,而传统的用于啤酒腐败菌检测的方法耗时长,不能满足实际需求.由于腐败菌污染的啤酒通过色谱检测,相应组分(生物胺、有机酸和风味物质)都会有特征峰的产生,所以本研究通过建立无腐败菌污染的啤酒中各组分的标准色谱图,再使啤酒强制染菌,对其组分进行色谱分析,并与标准色谱图进行比较,从而找出各组分对应的特征峰.未来,此方法可用于实际生产线上快速检测啤酒是否发生微生物污染.