以UPS构建的重组酿酒酵母表达载体及其稳定性研究

采用通用载体质粒融合系统UPS构建了一种以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的酿酒酵母表达载体pYES-GFP,并研究了其在重组酿酒酵母中的稳定性.实验表明,所构建的附加型质粒pYES-GFP在经近100代传代后,仍未发生丢失,具有良好的稳定性.同时,通过实验验证了,UPS在进行表达载体构建时快速、简便、高效.
以酿酒酵母单倍体CEN.PK1与双倍体CEN.PK2为研究对象,利用改良热酚法,快速高效地提取酿酒酵母总RNA.结果显示应用该方法提取的酿酒酵母CEN.PK1和CEN.PK2的总RNA经分光光度计测定浓度为7.63 μg/μL和3.77 μg/μL,OD260/280分别为2.10和2.04,OD260/230分别为2.32和2.24,浓度与纯度均能达到后续分子生物学试验的要求.经PCR与荧光定量PCR检测,该方法提取的RNA无DNA污染,可作为PCR反应的模板,与Trizol方法提取RNA相比,该方法不仅浓度高并且可将提取时间由常规的2.5 h缩短为1.5 h,具有操作简单、高质、高效等优点,经多次试验证明,此方法同样适用于酿酒酵母总RNA的大量提取试验,有较高的实用价值.
本实用新型公开白酒糟制备活性炭装置，包括一体化炉、燃烧炉、燃气锅炉，所述燃烧炉产生的热烟气从下向上依次通过一体化炉的活化段、炭化段、干燥段，所述燃气锅炉产生蒸汽送入活化段，干燥段的换热元件为并排交替设置的收气角盒和放气角盒，还包括气流干燥送料系统，所述白酒糟经气流干燥送料系统送入干燥段入口；相邻的收气角盒和放气角盒侧板之间为料道，所述收气角盒和放气角盒的侧板倾斜设置，使料道下端的出料口宽度大于上端的进料口宽度。本实用新型采用气流干燥送料系统将白酒糟送入一体化炉，同时将干燥段和炭化段的料道设置为上窄下宽的结构，避免物料形成架桥，确保物料顺利穿过一体化炉，提高一体化炉运行的稳定性。
酒样经稀硝酸消解,动态反应池-电感耦合等离子体质谱法测定消解液中的镉、汞、铅和铬.通过优化硝酸溶液体积分数、消解温度、消解时间和样品稀释倍数,确定这4个参数的最优值分别为50％、95℃、1h和5倍.此外,在降低基质干扰、消除汞吸附、优化仪器条件等方面进行讨论.利用建立的方法测定红葡萄酒、白葡萄酒、白酒、啤酒和黄酒中的镉、汞、铅和铬含量.酒样中镉、汞、铅和铬的检出限分别为0.01、0.01、0.08、0.03μg/L,回收率在89.6％～106.5％之间.此方法高效、灵敏、准确,适合大批量样品的同时处理.
为解决酿酒葡萄机械化收获作业的输送难题,提高酿酒葡萄收获机的工作稳定性,设计了一种酿酒葡萄收获机收集输送装置,并分别对其结构、工作原理进行了阐述.主要对该装置的收集输送部分及驱动部分进行了设计,收集输送部分由导轨支撑的圆环输送链带动戽斗将振落的葡萄颗粒收集并输送至料箱;驱动部分带动圆环输送链在导轨内运动.同时,分析了圆环链与链轮啮合过程,确定了链轮不发生爬齿现象的条件.该设计为酿酒葡萄收获机的继续研发提供了技术支撑和理论依据.
应用超高效液相色谱-串联质谱（ UPLC-MS／MS）技术定量检测了啤酒和麦汁中的2，5-二甲基-4-羟基-3（2H）-呋喃酮（DMHF）、2（或5）-乙基-5（或2）-甲基-4-羟基-3（2H）-呋喃酮（EMHF）和2-乙酰吡咯（2-AP）3种麦香风味物质。使用 C18固相萃取柱净化样品。采用 ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.8μm）分离，以0.1％（ v／v）甲酸水溶液和0.01％（ v／v）甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱。结合这3种化合物的保留时间，在正离子模式下，采用多反应监测（ MRM）技术进行定量检测。当质量浓度低于1000μg／L 时，校准曲线的线性良好（R2＞0.999）。方法的加标回收率在74.3％～86.7％之间，相对标准偏差（RSD，n＝6）在4.8％～7.3％之间。由于酵母发酵时会生成 DMHF和 EMHF，导致啤酒中这两种物质的含量明显高于麦汁。某些品类啤酒如印度淡色爱尔啤酒（ IPA），通常含有较高的麦香风味物质。该法样品处理简单，选择性好，且灵敏、准确、重现性好，可用于啤酒生产的过程控制。