酿酒酵母CICC1747醛糖还原酶基因的克隆及表达

采用PCR技术以酿酒酵母CICC1747基因组DNA为模板扩增得到醛糖还原酶基因GRE3,插入到pET-15b载体的NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点之间,构建了酿酒酵母醛糖还原酶原核表达载体pET-15b-GRE3.将该载体转化到大肠杆菌菌株Rosetta(DE3)中,重组菌株用IPTG诱导表达,采用紫外分光光度法测定醛糖还原酶活力,并对其表达条件进行初步优化.SDS-PAGE电泳结果显示在分子量约37 kD处有明显的特异性蛋白质条带.发酵液的比酶活最高为54.94mU/mg,与酿酒酵母野生菌株相比提高了近10倍.
酒样经稀硝酸消解,动态反应池-电感耦合等离子体质谱法测定消解液中的镉、汞、铅和铬.通过优化硝酸溶液体积分数、消解温度、消解时间和样品稀释倍数,确定这4个参数的最优值分别为50％、95℃、1h和5倍.此外,在降低基质干扰、消除汞吸附、优化仪器条件等方面进行讨论.利用建立的方法测定红葡萄酒、白葡萄酒、白酒、啤酒和黄酒中的镉、汞、铅和铬含量.酒样中镉、汞、铅和铬的检出限分别为0.01、0.01、0.08、0.03μg/L,回收率在89.6％～106.5％之间.此方法高效、灵敏、准确,适合大批量样品的同时处理.
本文介绍运用先进的分析、计算仪器与新型白酒的人工勾兑技术、感官品评相结合,由计算机部分代替人工,控制、降低酒中有害成分对消费者的伤害.在人工干预下实现计算机检测、分析、勾兑、新产品开发等目的,突破单一靠口感传授配方的传统观念.
SpyTag/SpyCatcher环化技术是一种自发迅速的共价连接反应,通过环化蛋白的骨架以实现目标蛋白的环化,从而提高目标蛋白稳定性.研究显示,SpyTag/SpyCatcher技术介导的环化过程不受环境的影响,不会影响目标蛋白原本的催化活性和功能,且一旦完成便具有极强的稳定性.小泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifiers,SUMOs)是一种十分有效的促溶标签,广泛应用于重组蛋白的原核表达过程中.泛素样特异蛋白酶1(ubiquitin-like-specific protease 1,Ulp1)是SUMO特异性蛋白酶中的一个重要成员,具有将SUMO从目标融合蛋白上切下,不残留任何氨基酸碱基的特异性酶切活性,且参与SUMO的成熟过程,但较差的稳定性限制了其应用.本研究使用截断型Ulp1(Gly304～Lys621)代替全长Ulp1,并对其序列进行了优化,得到了重组截断型Ulp1.重组截断型Ulp1既具有Ulp1全部的酶活性,又能更好地在大肠杆菌(Escherichia coli)中高效表达.本研究设计并表达了重组截断型(recombinant truncated Ulp1-His6,rtUlp1)、SpyTag-rtUlp1-SpyCatcher-His6(crtUlp1)和Spy-TagΔDA-rtUlp1-SpyCatcherΔEQ-His6(lrtUlp1)三种蛋白酶.综合比较3种蛋白酶的最适反应条件以及热稳定性,结果显示,crtUlp1的最佳反应酶切温度比lrtUlp1高10℃,比rtUlp1高5℃.crtUlp1在40℃条件下孵育2 h后仍保留87.3％的相对酶活,lrtUlp1在40℃条件下孵育2 h后仍保留43.69％的相对酶活,而rtUlp1几乎丧失了全部的酶活.且crtUlp1在广泛的酸碱范围内都能保持较高的酶活,而rtUlp1与lrtUlp1只在其最佳反应pH下表现出较高的酶切活性.本研究利用SpyTag/SpyCatcher技术获得了高稳定性的rtUlp1,评价了环化结构对rtUlp1热稳定性的影响以及SpyTag/SpyCatcher技术对rtUlp1热稳定性提高的效果,为获得具有高热稳定性的SUMOs特异性蛋白酶及促溶标签SUMOs的广泛使用提供技术基础.
本实用新型涉及白酒生产领域，公开了一种露天罐区用白酒储罐。该露天罐区用白酒储罐，包括罐体，其特征在于，在罐体的顶部设置有防晒水喷淋环，在罐体的侧壁底部设置有防晒水回收槽，所述防晒水回收槽和防晒水喷淋环之间设置有循环泵。本实用新型在罐体上设计防晒水喷淋与回收的装置，使露天罐区用白酒储罐定型化、成套化、规范化；防晒水循环利用，既改善罐区的操作环境，又减少水资源的浪费，能够达到节能减排的目的。
本发明涉及一种新会柑果肉蒸馏白酒及生产方法，包括以下质量份数的原料：新会柑果肉100份，白砂糖2?5份，发酵物0.25?0.7份。制备方法包括：经过原料挑选、清洁、整理、发酵后，经过两次蒸馏，第一次出酒酒精度平均值为27％～35％Vol.，第二次出酒酒精度平均值为43.9％～65％Vol.。采取与传统浓香型白酒生产工艺相结合的方法，一方面充分利用浓香白酒生产过程存在的有益菌群，另一方面在水果白酒的感官品质上增加了浓香型白酒特有的香味物质与水果发酵香味相得益彰，加工过程直接使用原材料与白砂糖、酒曲进行调配、发酵、蒸馏、勾兑而成，没有添加任何粮食、食品添加剂和催化剂，保证成品酒纯正，主要用于新会柑果肉处理酿酒与柑橘果农柑橘次品、滞销时价值转换。xa0xa0