绿色木霉EG Ⅲ基因的克隆及其在工业酿酒酵母中的整合表达

通过RT-PCR从绿色木霉AS3.3711中克隆得到EG Ⅲ基因,序列分析显示该基因编码序列全长为1 257 bp,编码418个aa,且自身带有21个aa的信号肽序列,与里氏木霉eg3的同源性为99.6%.将该基因连入酿酒酵母多拷贝整合型表达载体pScIKP中获得重组质粒,线性化后电转化酿酒酵母工业菌株AS2.489,通过SDS-PAGE蛋白电泳、刚果红染色和酶活测定对转化子进行了分析.结果表明:转化子有明显的重组EG Ⅲ表达带,能够产生CMC水解圈,说明eg3基因已在酿酒酵母中获得了正确的分泌表达,表达EG Ⅲ的重组菌产酶高峰出现时间为60 h,最高酶活接近120 U/mL,重组酶EG Ⅲ的最适温度为60 ℃,最适pH为6.0,转化子的遗传稳定性达到99.17%,实现了绿色木霉eg3基因在工业酿酒酵母中的稳定高效表达.
本发明涉及保健食品领域，具体是涉及一种养生白酒原料、石斛养生白酒及其制备方法。一种养生白酒原料，其特征在于，包括以下重量比的成分：石斛1～3份；黄精1～3份；枸杞1～2份。本发明将三种药食同源植物原料进行合理搭配作为养生白酒原料，来开发成石斛仙酒，具有较高的市场价值。同时，本发明公开的制备工艺将现代食品新技术和传统方法相结合，采用多级耦联澄清技术，将化学澄清技术和超滤澄清技术耦联应用到白酒产品生产中，有效消除了沉淀，保证了产品的质量，很好的解决了现有技术中酒类生产所存在的技术问题。
本发明公开了白酒原粮汽爆糊化处理方法，将粮食用热水清洗浸泡，将水排尽自然晾干，使粮粒吸水充足、开口率达到93％～95％，含水量达40％～45％；再将粮食置入80℃～90℃汽爆罐中，通入干蒸汽至汽爆罐内压力达到1.5～3.0MPa，调节蒸汽流量，保持该压力5～10分，打开汽爆罐排料阀，将粮食汽爆喷放到常压接料罐中，待粮食物料全部排出，气爆罐压力降至零，开启接料仓仓门，收集粮食物料。显著优点是：通过汽爆作用，增加原料利用效率，减少糠壳用量，明显提高出酒率；汽爆可降低甚至消除白酒中甲醇含量，提高了白酒安全，由于在制酒工艺中去除了粉碎和蒸煮工序，避免环境污染，减少了人力、能耗、降低了白酒酿造成本。
旨在研究日粮中添加一定量的酿酒葡萄皮渣对绵羊繁殖性能及睾丸抗氧化性能的影响.试验选取30只5月龄,体重(25±1)kg的杜泊×小尾寒羊杂交公羊,采用完全随机设计平均分为5组.1组自由活动,其余4组单栏饲养,建立应激模型.自由活动绵羊饲喂未添加葡萄皮渣日粮,单栏饲养绵羊分别饲喂不同葡萄皮渣添加水平(0％、5％、10％、20％)日粮.试验期80 d.试验结束后,屠宰取样,测定睾丸系数并作附睾精子分析,测定睾丸组织抗氧化水平,对睾丸组织中Cu-ZnSOD、CAT、GPx4及Nrf2 mRNA和蛋白相对表达量进行研究.结果表明,与自由活动组相比,单栏组绵羊睾丸组织中MDA及ROS水平升高(P＜0.01),睾丸重量显著降低(P＜0.05),睾丸系数也表现出下降趋势(P=0.06),附睾精子密度及顶体完整率显著降低(P＜0.05),精子活动率极显著降低(P＜0.01),精子畸形率极显著升高(P＜0.01),表明单栏饲养方式对绵羊造成氧化应激,并在一定程度上影响绵羊繁殖性能.适量添加酿酒葡萄皮渣后,绵羊附睾精子密度和精子活动率均显著升高(P＜0.05),精子畸形率显著降低(P＜0.05),睾丸组织MDA含量显著下降(P＜0.01),SOD、CAT及GSH-Px活性均显著提高(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01);睾丸组织中Cu-ZnSOD mRNA相对表达量显著提高(P＜0.05),Cu-ZnSOD、CAT、GPx4蛋白相对表达量显著提高(P＜0.05).综上表明,酿酒葡萄皮渣可以提高单栏饲养方式下绵羊睾丸组织抗氧化性,进而改善绵羊繁殖性能.
啤酒废弃物主要是啤酒废酵母和啤酒糟,在食品工业中有广泛应用.啤酒废酵母可用于生产酵母浸膏、营养调味品、胞壁多糖及蛋白粉;啤酒糟可用于制作面包饼干,生产调味品、食品添加剂、复合氨基酸,用作食用菌栽培原料,发酵生产燃料乙醇、甘油及沼气.啤酒废弃物在食品工业中具有非常广阔的应用前景,具有较好的社会效益和经济效益.
以霞多丽、品丽珠为对照品种,对"红杂系列"4个酿酒葡萄新品系的酿酒特性进行了对比试验,结果表明:①"红杂系列"四个品系试验样品的酒精度分别为10.84%、10.59%、11.02%、11.41%,均高于对照品种霞多丽(10.19%)、品丽珠(10.10%),符合酿制优质葡萄酒的要求,样品中残糖满足干葡萄酒要求,干浸出物含量高,滴定酸、pH值均在合理范围内.②"红杂系列"葡萄酒样品的感官评价结果显示:样品红杂一号酒液金黄、有光泽,果香、酒香突出,口味纯正协调、醇厚爽口、后味长久,典型明确、风格良好,综合评价高于对照霞多丽,用其做干白葡萄酒有良好的潜力与品质优势."红杂系列"新品系的主要经济性状、农艺性状均接近或超过对照品种.其酿酒特性也显示出一定优势,可初步确定为适合我省发展的优良酿酒品种和种质资源.