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酿酒酵母无机焦磷酸酶基因在大肠杆菌中的表达及其意义

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-05-30 阅读:558
目的:利用大肠杆菌表达酿酒酵母无机焦磷酸酶(Y-IPPA),获得具有活性的酿酒Y-IPPA.方法:以酿酒酵母基因组为模版,通过查询NCBI获得酿酒酵母无机焦磷酸酶序列,设计引物,用PCR方法获得酿酒Y-IPPA基因序列,插入克隆性载体pMD(R) 19-T Simple Vector中,并转化至大肠杆菌DH5α扩增,获得重组质粒,经酶切及测序验证正确后,将酶切的目的片段插入到原核表达载体p ET28 (a)中,再转化大肠杆菌DH5α扩增,经酶切及测序验证正确后,转化大肠杆菌BL21 (DE3)表达蛋白,通过IPTG诱导表达出Y-IPPA,以金属离子亲和层析蛋白纯化系统纯化蛋白,并测定其比活和酶学性质.结果:获得与pMD(R) 19-T SimpleVector一致的Y-IPPA碱基序列,构建了重组表达质粒pET28 (a) -Y-IPPA,并转化大肠杆菌BL21 (DE3),以IPTG诱导并进行SDS-PAGE电泳,在相对分子质量为32 000处可见Y-IPPA蛋白条带;镍柱亲和层析纯化目的蛋白,其中一组的蛋白浓度、活性和比活分别为0.312 g·L-1、31.13 units·mL-1和99.73 uints·mg-1.结论:成功制备Y-IPPA蛋白,为进一步研究其酶学性质奠定了基础.
花22(原名秀96-22)是嘉兴市农科院采用类型育种法与上海市农科院生物技术中心运用花药培养技术共同选育出的大麦新品种.连续多年的品系鉴定试验结果表明,该品种能够持续高产,产量平均比对照"花30"增产17.5%.经国家啤酒大麦品质检测中心测定,花22千粒重(绝干)40.5 g,蛋白质10.99%,制啤品质好.2006年2月22日通过上海市农作物品种审定委员会审定,定名为"花22".
应用以生化法为主体的工艺:水解酸化--生物接触氧化法处理啤酒废水,通过实际运行表明,处理的水质稳定、处理效率高.
沼渣是沼气工程中产生的副产物,由于其富含营养物质及微量元素,而广泛应用于农业,畜牧业,养殖业等方面.Bt生物农药是一类具有选择性和高效性的杀虫剂,但是由于其原料的成本较高从而限制了生物农药的发展,而沼渣中富含微生物所需要的各种养分并且价格低廉,因此该文以生产沼气后的沼渣为资源,运用固态发酵,探索了利用沼渣制备苏云金杆菌生物农药的可行性.首先对沼渣营养成分进行了分析,分析表明其营养物质丰富,适合苏云金芽孢杆菌的生长与增殖.其次对菌种的沼渣培养基进行了优化,优化后的培养基质量分数为:50%的沼渣添加35%啤酒糟,10%玉米粉,5%豆饼粉,并与常规培养基和单纯沼渣的发酵进程进行了对比.在优化培养基条件下,发酵48 h后,芽孢数达到5.23×1010 CFU/g,毒力效价为16100 IU/mg.在传统培养基中芽孢数2.55×1010 CFU/g,毒力效价12500 IU/mg,而在单纯沼渣中Bt产量及毒性为1.74×108 CFU/g,6000 IU/mg.采用沼渣发酵制备Bt生物农药与传统培养基比较,降低了36.3%的生产成本,且发酵性能优良,也为沼渣的利用寻找到崭新的途径.
本研究旨在完善有机栽培理论.为有机酿酒葡萄栽培的整枝方式提供理论依据.用CIRAS-2便携式光合作用测定系统研究了盆栽赤霞珠(Cabernet Sauvignon)光合特性.结果表明:有机栽培条件下,赤霞珠4-5片叶短副梢净光合速率最高;主蔓从茎尖开始3-5叶位Pn就可以达到最大值(10.4μmol·m-2·s-1).但仅为短副梢最大值的50%.赤霞珠东侧叶片在早上8:00时Pn就达到一天中的最大值12.58μmol·m-2·s-1,但下降较快;朝南叶片上午11:00出现峰值(9.73gmol·m-2·s-1);西侧叶片在16:00虽然也出现峰值(7.59μmol·m-2·s-1),但只是南侧叶片峰值的72.6%.赤霞珠光饱和点(LSP)为97μmol·m-2·s-1,光补偿点(LCP)为31.9μmol·m-2·s-1.CO2对赤霞珠光合速率的提高有极大的促进作用,赤霞珠CO2补偿点(CCP)为56μL·L-1,CO2饱和点为1290μmol·m-2·s-1.
植物纤维原料是地球上极为丰富、廉价而又可再生的资源,它的利用一直是国内外的研究热点.纤维素酶是一种高活性生物催化剂,是一组能够降解纤维素生成葡萄糖的酶的总称,在食品、饲料、酿酒、纺织、中药提取和造纸等众多的工业领域有广泛的应用价值.

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