木糖发酵酵母Pichia stipitis木糖还原酶基因XYL1在酿酒酵母中的表达

通过PCR方法克隆得到树干毕赤氏酵母木糖还原酶(XR)基因XYL1.将该基因连入酵母表达载体pYX212的强启动子磷酸丙糖异构酶(TPI)启动子下,得到融合表达载体pYX-XYL1.通过电转化方法将pYX-XYL1转入酿酒酵母Saccharonmyces cerevisiae W303-1A中,酶活测定表明,在酿酒酵母中树干毕赤氏酵母木糖还原酶(XR)基因XYL1得到活性表达,2酿酒酵母转化子粗酶液中木糖还原酶活分别为0.89U/mg(蛋白)和0.83U/mg(蛋白),为供体菌的1.5倍多.与基因供体菌不同,木糖还原酶基因在酿酒酵母中表达不需木糖诱导,为组成型表达.树干毕赤氏酵母木糖还原酶(XR)基因XYL1的成功表达为后续的利用木糖的酿酒酵母菌株的构建奠定了基础.
发明公开了一种大米白酒酿造工艺，主要是解决如何将黄瓜藤和大米、栗子、小米、燕麦、白芝麻、荷叶科学合理地应用于酿酒工艺中，最大限度地解决将黄瓜藤中营养物质提取至酒中的技术问题，它是将黄瓜藤和大米、栗子、小米、燕麦、白芝麻、荷叶等原料一起进行发酵、酿造过程。与现有大米白酒酿造技术相比，改善了统酿造工艺，解决了传统酿造工艺中的发酵不充分，酒体营养成分含量低、浑浊不透明的问题，本发明酿造的大米白酒口味更加醇香可口，具有降脂、减肥、活血通经的药用功能。
此研究旨在探究复合菌剂发酵杏鲍菇菌糠的饲用品质与安全性,为杏鲍菇菌糠饲料化利用提供依据.将经过筛选纯化的枯草芽孢杆菌、黑曲霉、乳酸片球菌及酿酒酵母优化复合后发酵杏鲍菇菌糠,测定菌糠原料、自然发酵组(对照组)及混菌发酵组(试验组)的常规养分、发酵品质、氨基酸组成及霉菌毒素与重金属含量,综合评价混菌发酵杏鲍菇菌糠的饲用品质与安全性.结果表明,试验组粗蛋白、粗脂肪含量分别为14.56％、1.02％,显著高于原料和对照组(P<0.05);中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量分别为50.77％、37.70％,显著低于原料与对照组(P<0.05);试验组乳酸含量为22.78 g·kg-1,显著高于对照组(P<0.05).乙酸、丙酸、丁酸、总挥发性脂肪酸分别为6.70、0.44、0.54和6.99 g·kg-1,氨态氮/总氮为1.65％,均显著低于对照组(P<0.05);试验组的黄曲霉毒素B1含量显著低于原料与对照组(P<0.05),呕吐毒素与玉米赤霉烯酮含量有下降趋势,但与其他两组差异不显著(P>0.05);对照组与试验组重金属砷、铅、镉、汞、铬的含量显著高于原料组(P<0.05),但3个组霉菌毒素及重金属含量均符合国家饲料卫生标准(GB 13078-2017);发酵前后氨基酸种类并无变化,共检测出16种氨基酸,其中必须氨基酸7种,分别为苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸,未检测出酪氨酸.试验组必需氨基酸含量及总氨基酸含量分别为26.67 mg·g-1、86.13 mg·g-1,均显著高于原料与对照组(P<0.05),除谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸外,其他氨基酸组分含量均显著高于原料与对照组(P<0.05);混菌发酵试验组有浓郁的面包香味和酸香味,质地松软,颜色为浅褐色,优于自然发酵组.研究表明,杏鲍菇菌糠混菌发酵后营养价值明显提高且饲用安全,饲用品质得到明显改善.
以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到蔗糖酶基因(suc 2),并将其克隆到表达载体pSE380中,将得到的重组质粒pSE-suc 2转化进E.coli BL21中,利用镍金属螯合层析方法分析测定其酶学性质.重组菌株的SDS-PAGE结果显示重组蔗糖酶基因(suc 2)有60kDa目的蛋白出现,纯化的SDS-PAGE分析得到均一的蛋白条带;重组蔗糖酶的Km值为47.73mmol/L,最大反应速率为79.59mg还原糖mg-1蛋白min-1,最适温度为42℃,最适pH值为5.5,Zn2+、Cu2+对重组蔗糖酶酶活有较强的抑制作用,Ba2+、Mg2+、Mn2+对重组蔗糖酶酶活稍有激活作用.
为了掌握啤麦品种单二最佳的播种期,获得最高的产量,争取最好的效益,2010年秋播,我们进行了单二的播期试验,现将试验结果报告如下。
为获得高产木聚糖酶酿酒酵母工程菌,利用rDNA整合法构建木聚糖酶酿酒酵母整合表达载体,实现木聚糖酶基因的多拷贝表达,并利用微滴数字聚合酶链式反应技术对转化子拷贝数进行检测,分析木聚糖酶基因拷贝数与酶活力之间的关系.结果表明:利用rDNA整合法获得了10?株不同拷贝数木聚糖酶酿酒酵母工程菌,对其酶活力进行测定,发现当拷贝数小于9时,菌株产酶能力随拷贝数增加而增强,9?拷贝数时菌株产酶能力最强,酶活力为308?U/mL,超过9?拷贝,产酶能力降低.