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酿酒酵母rav2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-01 阅读:903
RAVE(regulator of the H+-ATPase of the vacuolar and endosomal membranes)复合物由Ravl p,Rav2p和Skplp 3个亚基组成.将酿酒酵母中的rav2基因克隆到表达载体pETDuet-1中,构建重组质粒pETDuet-R2,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.通过IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组菌在诱导后表达出目的蛋白.目的蛋白经Ni-NTA凝胶纯化后再经质谱进一步验证确定为酿酒酵母的Rav2p蛋白.目前国际上还没有有关Rav2p的结构和性质以及RAVE亚基之间相互关系的研究.重组质粒pETDuet-R2的成功构建以及Rav2p的可溶性表达为研究RAVE亚基之间的相互作用以及V-ATP酶的活性调节机理打下基础.
啤酒是深受人们欢迎的饮料之一,但随着啤酒消费量的显著增长,人体患痛风等"啤酒病"的风险大增,对消费者身体健康造成严重威胁.低嘌呤啤酒是相对于传统啤酒而言总嘌呤含量较低的一类啤酒产品,主要针对患有痛风或高尿酸血症的啤酒爱好者所研发,同时对于普通消费者来说也是一种更健康的选择.本文主要从啤酒生产过程中嘌呤类物质的来源及代谢途径、低嘌呤啤酒的生产现状以及降低嘌呤类物质含量的方法等方面进行阐述和讨论,并根据实际生产状况提出低嘌呤啤酒的研发思路,为优质麦芽和啤酒生产提供理论指导.
本发明涉及包括送箱辊道、机架、盒装白酒整列机构、平移升降系统、撑箱机构、抓手、丝杆、伺服电机、2根方形导轨、盒装白酒输送链板;盒装白酒整列机构的装箱平台、丝杆、伺服电机、2根方形导轨分别安装在机架上,且平移升降系统的4个滑块与机架上端的2根方形导轨配合;且丝杆的一端与伺服电机相连,平移升降系统的平移升降架穿在丝杆上并通过一个螺母固定在一起,抓手与平移升降系统的2根光轴下端连接,盒装白酒输送链板、送箱辊道均固定于地面并与盒装白酒整列机构、平移升降系统、抓手、撑箱机构配合完成盒装白酒装箱功能。本发明具有适应白酒盒型范围广、装箱定位准确、搬运负载大、性能稳定等优点。解决困扰白酒行业多年装箱难题。
试验以一种酿酒葡萄为原料,利用顶空固相微萃取/气相色谱-质谱联用技术(HS-SPME/GC-MS)检测了不同可同化氮含量(200、300、400 mg/L)、酵母多糖(150、250、350 mg/L)、发酵温度(14、18、22℃)、初始pH值(3.3、3.5、3.7)和SO2添加量(40、70、100 mg/L)处理发酵酒样中的挥发性香气化合物,探讨了复合酿造因子对贵人香干白葡萄酒主要香气物质含量的影响关系.结果表明,300 mg/L的可同化氮有利于高级醇、酯类、单萜化合物的积累;酵母多糖添加量为250 mg/L时,单萜化合物质量分数达到最大值(198.54 μg/L);发酵温度从14℃升高到22℃时,高级醇含量显著升高,酯类和单萜含量显著降低;提高葡萄汁初始pH有利于单萜化合物的积累,不利于高级醇、酯类的生成;添加70 mg/L的SO2时,单萜化合物质量分数最高(181.73 μg/L).正交试验极差分析表明,发酵温度和SO2添加量对高级醇含量影响较大;发酵温度与可同化氮对酯类香气物质含量的影响较大,酵母多糖和pH值对单萜类香气物质含量影响较大.各处理组间的聚类分析可知,可同化氮和酵母多糖对主要香气化合物的影响关联度较高、葡萄汁初始 pH 值和 SO2添加量关联度较高.较低的发酵温度有利于酒样中香叶醇、异戊醇、苯乙醇、辛酸乙酯的生成,添加中等浓度的可同化氮和酵母多糖可促进乙酸异戊酯、乙酸己酯和己酸乙酯的合成,较高的初始pH值有利于芳樟醇、香茅醇和香叶醇的积累.综合分析,发酵温度18 ℃、初始pH 值3.5、70 mg/L SO2、300 mg/L可同化氮、250 mg/L酵母多糖酿造贵人香干白葡萄酒,可有效促进酒样中主要香气化合物的合成释放.
分析了我国酶制剂工业的发展现状及酶制剂工业面临的主要问题,并介绍了酶制剂工业产品在生产生活中的应用,如在面包焙烤业、果蔬加工业、造纸业、啤酒业、纺织业等行业的应用,以期为进一步研究酶制剂和促进酶制剂工业的发展提供一定的参考.
介绍有关啤酒酵母的生活史,单倍体接合型基因的结构、表达、转换与控制,啤酒酵母的有性接合过程,性激素的结构、功能与分泌、性凝集物质的功能、分泌等的研究进展与成果.

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