金堂黑山羊FSH受体基因在酿酒酵母细胞中的表达与定位

通过激光共聚焦显微镜对卵泡刺激素受体(FSHR)FSHRA和FSHRB与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白的表达和定位进行观察,发现FSHRA和FSHRB不仅在酿酒酵母细胞中有表达,而且表达的蛋白质主要定位在酵母的细胞膜上.
现代人们习惯所称的“酒楼”，是有几分历史沿革的。以前，由于帝王发现在高楼上“把酒临风”更有帝王风范，于是令工匠筑楼台以宴饮，“酒楼”便由此应运而生。公元前11世纪左右，官方设“酒官”，悬“旗”为标志。古人认为世间的一切由上天主宰，《星经》载：“酒旗三星，在柳（星）北、轩辕（星）右角南，酒官之旗也，主宴享饮食。”故而帝王将相饮宴时，往往悬酒旗以昭天。
对利用底物广泛的乙醇发酵菌株马克斯克鲁维（ Kluyveromyces marxianus） DL1菌株与工业用乙醇发酵菌株酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）6525利用己糖（葡萄糖、甘露糖、半乳糖）和戊糖（木糖、阿拉伯糖）的情况进行对比研究。结果发现：以己糖为底物时，K?marxianus DL1均表现出细胞生长快、乙醇得率高的特点；在不通气、糖20 g／L条件下，K?marxianus DL1的最大乙醇质量浓度均比S?cerevisiae 6525高出10％左右，细胞量及乙醇生产强度分别是S?cerevisiae 6525的近2和1?7倍。当以戊糖为底物时，K?marxianus DL1可以利用木糖和阿拉伯糖；在不通气、糖20 g／L条件下，K?marxianus DL1利用木糖产木糖醇和乙醇，乙醇终质量浓度可达7?68 g／L，木糖醇质量浓度为9?12 g／L；以阿拉伯糖为发酵底物时，阿拉伯糖醇的产量可达6 g／L左右；而S?cerevisiae 6525不能利用戊糖。马克斯克鲁维酵母比酿酒酵母更适合纤维乙醇生产。
半乳糖激酶基因(GAL1)启动子是酿酒酵母(Saccharumyces cerevisiae)表达外源蛋白的高效诱导性启动子,其表达效率受到GAL4的调控和半乳糖的诱导,改变酵母的GAL基因型有助于提高外源蛋白的表达水平,但重组GAL菌株的菌株特性仍需要进一步研究以确保蛋白表达的稳定性.本研究分别对敲除了不同GAL1和插入不同GAL4基因拷贝数的重组GAL基因型酵母进行了生长发酵性能和遗传稳定性研究.结果表明,重组菌株的GAL基因型在传代过程中较为稳定,没有发生回复突变和遗传霉素(G418)和博来霉素(Zeocin)抗性恢复的情况;与对照原始MS-1酵母相比,重组菌株(SG1、DG115、DPG65和GQ21)的生长性能在葡萄糖培养基中的生物量略有下降.与半乳糖诱导培养基(yeast peptone galactose,YPG)相比,GAL1基因的敲除在甘油培养基(yeast peptone galactose glycerin,YPGL)中对酿酒酵母半乳糖利用的影响更为显著.其中,在YPG和YPGL培养基内,对照MS-1、SG1、DG115和DPG65利用完所有半乳糖分别需要20、20、20、26、20、44、44和68 h,而GQ21均无法利用半乳糖.GAL基因的敲除和插入没有影响酿酒酵母的热致死温度,原始菌株和重组菌株皆为54℃.本研究将为工业利用酵母表达系统大规模、低成本生产重组蛋白提供研究基础.
为了提高啤酒糟的利用价值和应用范围，将啤酒糟蛋白作为原料部分替代面粉制备了曲奇饼干，并进行感官评价和质构分析实验。结果表明啤酒糟蛋白曲奇饼干的最佳配方为：面粉和啤酒糟蛋白合计100％，鸡蛋50％，黄油45％，糖粉20％，其中啤酒糟蛋白量占面粉和啤酒糟蛋白总量比的15％。，口感酥脆，麦香味怡人，适于工业生产。
为了给康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)在东北农区奶牛业的应用提供基础理论数据,应用CNCPS体系提出的蛋白质与碳水化合物分类方法,对东北农区27种典型奶牛饲料进行粗蛋白质(CP)、非蛋白氮(NPN)、可溶性蛋白质(SCP)、酸性洗涤不溶蛋白质(ADIP)、中性洗涤不溶蛋白质(NDIP)及酸性洗涤纤维(ADF)、中性洗涤纤维(NDF)、木质素(ADL)和淀粉(Starch)进行了测定,并通过CNCPS提出的计算方法计算了饲料粗蛋白质中的非蛋白氮(PA)、快速降解蛋白质(PB1)、结合蛋白质(PC)、中度降解蛋白质(PB2)、慢速降解蛋白质(PB3)和碳水化合物中的不可利用纤维(CC)、可利用纤维(CB2)、淀粉、果胶(CB1)和糖类(CA).结果表明:SCP/CP的比例以大庆地区全株玉米青贮饲料最高(68.74%),沈阳湿啤酒糟最低(4.12%);ADL/NDF比例则以鞍山苹果渣最高(34.51%),沈阳大麦为最低(2.46%).蛋白质中真蛋白质的含量以沈阳地区豆粕为最高(97.07%),以大庆地区全株玉米青贮最低(26.81%);碳水化合物中不可利用纤维(CC/CHO)比例则以鞍山苹果渣最高(65.01%),齐齐哈尔玉米为最低(1.60%).由结果可知,CNCPS体系分析方法测定指标较多,能够全面反映了饲料的营养成分及在奶牛体内的消化吸收,建议今后可作为东北农区评定奶牛饲料营养价值的方法.