重组猪表皮生长因子在酿酒酵母中的克隆表达及其生物学活性鉴定

猪表皮生长因子(Porcine epidermal growth factor,pEGF)能够刺激小肠DNA合成及细胞增殖,促进肠道发育,从而提高断奶仔猪生产性能及免疫功能等.由此,研发分泌表达猪表皮生长因子的益生菌,用于畜牧生产及临床医学具有重要意义.克隆内江猪乳腺组织EGF及酿酒酵母中分泌信号肽Mfα,在综合考虑酿酒酵母密码子使用频率和表达效率的基础上,人工合成优化后的内江猪EGF基因(Synthetic porcine epidermal growth factor,spEGF),构建pYES2-Mfα-spEGF表达载体并在酿酒酵母中成功表达.该重组酿酒酵母INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)表达蛋白spEGF进行Tricine-SDS-PAGE电泳、蛋白质免疫印迹、体外生物学活性检测及断奶SD大鼠体内生物学活性检测.根据RT-PCR和测序结果显示,成功地构建了pYES2-Mfα-spEGF表达载体并在酿酒酵母中实现表达;在Tricine-SDS-PAGE电泳及蛋白质免疫印迹中可以分别观察到目的条带及印迹条带;体外生物学活性检测结果显示,INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)表达蛋白spEGF对肠上皮细胞具有明显增殖作用(P＜0.05);断奶SD大鼠体内生物学活性检测结果表明,重组酿酒酵母组INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)能促进小肠发育(如绒毛高度、隐窝深度、小肠黏膜总蛋白、总DNA及RNA含量等)(P＜0.05),显著提高其生产性能(如体重、日增重、采食量及饲料转化率)及免疫功能(如IgA、IgG及IgM)等(P＜0.05).本研究成功构建的INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)菌液上清中目的蛋白的表达量约为30 mg·L-1,且具有高生物学活性,可以直接用于畜牧生产及临床医学.
研究了湿氧化爆破副产物甲酸、乙酸、糠醛对酿酒酵母生长、发酵过程、糖酵解和能量代谢以及细胞膜完整性的影响.通过研究发现,酿酒酵母对于甲酸、乙酸、糠醛的最大耐受浓度分别为1.8,6.0,2.0g/L.抑制剂对酿酒酵母乙醇发酵毒性依次为甲酸＞乙酸＞糠醛.在1×IC80时,乙酸对酿酒酵母糖酵解和能量代谢影响最小,在2×IC80和3×IC80时,糠醛对酿酒酵母糖酵解和能量代谢影响最小,而甲酸不论在任何浓度对酿酒酵母糖酵解和能量代谢都会产生很大的影响.与乙醇相比,甲酸、乙酸、糠醛对细胞膜完整性无显著的影响,从1 ×IC80～3×IC80分别造成的镁离子百分比为11％～20％,5％～12％,4.5％～8.4％,对照物乙醇则为55％.
RAD6最初是在酿酒酵母(S.cerevisiae)中发现的一种具有催化H2B单泛素化活性的泛素交联酶(E2),它具有一个UBCc结构域.早些年,人们对泛素系统在DNA损伤修复(DNA-damage repair,DDR)中的作用了解非常有限.近年来,泛素在DNA损伤修复中蛋白质招募过程中扮演的广泛角色逐渐被人们所认识.RAD6高度保守,能与多个泛素连接酶相互作用,在DDR中发挥重要作用.
以离子色谱、紫外可见分光光度法和气质联用等技术对乌酥梅和荸荠品种杨梅原汁的基本成分,以及杨梅干红优化实验样品的Aλmax值和主要芳香成分的相对含量进行了分析和研究.结果表明,荸荠品种杨梅原汁的酸度和色泽特性较适合杨梅干红的酿造,LAVIN D47活性酿酒干酵母是优良的主酵菌种,采用3%浓度的铝离子海藻酸固定化细胞,于30℃发酵可获得较好的酒色和风味.
本实用新型提供了白酒盒开启钥匙拆解设备，它包括底座，所述底座上固定有L型支撑板，所述L型支撑板的竖直侧壁上安装有推送气缸，在L型支撑板的顶部支撑板上固定安装有压料气缸，所述压料气缸的第一活塞杆的末端安装有压料模具；所述压料模具的正下方设置有用于对钥匙的铁片进行支撑的垫块；所述推送气缸的第二活塞杆末端安装有用于卡紧钥匙的塑料手柄的卡料模具。此拆卸工具能够用于白酒盒上开启钥匙的拆解，进而将塑料铁片和塑料手柄进行分离，再将塑料手柄进行回收利用。
一种白酒酒糟的利用方法，包括以下步骤：将酒糟制成酒糟培养基；向酒糟培养基中加入菌种，发酵7-10天，得到发酵产物。本发明工艺简单，使用方便，效果显著。