酿酒酵母菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的信号通路初步研究

文章旨在探索核因子-κB (NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路是否介导益生性酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(RECs)β-防御素-1(SBD-1)基因的转录.首先建立绵羊RECs培养体系作为体外试验模型,选用诱导SBD-1转录最高的菌液浓度和诱导培养时间进行信号通路初步研究,采用实时荧光定量逆转录PCR (RT-qPCR)对已建立的诱导SBD-1转录模型中的细胞膜受体——Toll样受体2(TLR2)、信号衔接蛋白——髓样分化因子(MyD88)以及NF-κB和MAPKs通路中的相关因子基因转录变化进行检测;然后选用NF-κB和MAPKs通路中的4种特异性抑制剂(即NF-κB通路特异性抑制剂PDTC、P38通路特异性抑制剂SB202190、ERK 1/2通路特异性抑制剂PD98059、JNK通路特异性抑制剂SP600125)通过单独或相互组合处理细胞后再进行诱导培养,同时采用RT-qPCR的方法检测用抑制剂处理绵羊RECs后SBD-1 mRNA的转录水平.结果表明:酿酒酵母菌刺激RECs后,NF-κB和MAPKs通路中各因子NF-κB、P38、JNK、ERK1/2、细胞膜受体TLR2与信号衔接蛋白MyD88的mRNA水平与未刺激组相比均有所升高,且呈显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);通过单独或组合添加抑制剂后再诱导,均发现特异性抑制剂PDTC、SB202190、SP600125、PD98059可极显著抑制酿酒酵母菌对RECs SBD-1的上调作用(P＜0.01),且P38通路特异性抑制剂SB202190的抑制效果最明显.结果提示,酿酒酵母菌诱导绵羊RECs SBD-1的转录可能与TLR2-MyD88-NF-κB/MAPKs通路有关,但以TLR2-MyD88-MAPKs中的TLR2-MyD88 P38通路为主要的信号通路.
提出了啤酒花中单宁的流动注射分析(FIA)法.本法将单宁注入Fe(Ⅲ)载流中,然后与1,10-二氮菲的0.03 mol/L H2SO4溶液混合,混合物经100 cm反应盘管,生成的1,10-二氮菲-Fe(Ⅱ)络合物在506 nm波长处拉测.方法快速、准确,测样频率为71样/h,相对标准偏差为1.1%,测定单宁的线性范围为0.11～300 mg/L检测限0.84 mg/L,成功地用于啤酒花中单宁的测定.
本发明公布了一种液态发酵生产米香型白酒的方法，属于酿酒技术领域。所述方法包括：原料粉碎、液化糊化、培菌糖化、发酵和蒸馏步骤，培菌糖化步骤如下：将糊化液冷却后加糖化酶，再加入小曲粉或根霉曲、以及乳酸菌培养液和酵母菌培养液，微耗氧状态下培菌糖化。该方法采用粉粮蒸煮液化后再液态培菌糖化从而实现小曲白酒生产机械化，改善了固态培菌糖化过程受气候、环境等因素影响导致质量不稳的缺陷；同时纯种培养的高产酯适量低产高级醇的酿酒酵母、乳酸菌和部分商品酶制剂与传统糖化发酵剂协同糖化发酵，部分净化发酵体系，补充传统糖化发酵剂的不足，大幅度增加米香型白酒中酯香物质的含量，同时控制高级醇的含量，显著提高米香型白酒的质量。
[目的] 为生产高辅料比啤酒确定最佳的酶制剂种类及酶解工艺.[方法] 比较13种酶制剂在制备酵母抽提物中的酶解情况,选择并确定最佳的酶制剂种类及酶解工艺.[结果] 在4种碱性蛋白酶中,碱性蛋白酶A的α-氨基氮得率最高.碱性蛋白酶A和风味蛋白酶的复合酶解试验表明,风味蛋白酶A的酶解情况优于风味蛋白酶B.β-葡聚糖酶和木瓜蛋白酶对α-氨基氮的得率影响不大.酵母抽提酶的α-氨基氮得率高于干酵母酶A和B的共同酶解得率.当料水比为1∶4时,滤液中α-氨基氮含量为900 mg/L左右.100 kg干燥酵母粉在酶解至α-氨基氮含量为4 000 mg/L时,可得浓度为10°P的醪液700 L,即α-氨基氮的得率为1∶7.[结论] 应用蛋白酶复合酶解制备酵母抽提物具有收率高、时间短、设备简单、操作方便、成本低的优点,在高辅料比啤酒的生产中应用较为可行.
目的 提取重组酿酒酵母 mRNA,并对动物细胞进行转染,为进一步探索证明重组酿酒酵母 mRNA可以作为基因治疗物质提供依据.方法 利用酶法制备重组酿酒酵母的原生质体后提取其总RNA.对提取的总RNA纯化后利用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增,鉴定GFP基因的正确无误后,脂质体转染绿猴肾细胞COS-7.在光显微镜下观察绿色荧光的发生.结果 成功制备重组酿酒酵母原生质体,克隆鉴定基因片段正确.转染细胞后有绿色荧光出现,能够表达目标基因.结论 成功制备了重组酿酒酵母原生质体,提取的mRNA能够在动物细胞中表达.证实重组酿酒酵母 mRNA可以作为基因治疗物质,能达到基因治疗的目的 .
通过对甘肃省啤酒大麦产业化的发展优势、现状以及存在问题的分析,提出甘肃省优质啤酒大麦产业化可持续发展对策;以市场为导向,以效益为纽带,建立优质啤酒大麦产业化生产基地:引入现代化企业管理制度,实行产业的规范管理,加强行业的强强联合,以加强与科研院所等院校联合协作,制定相关的地方性法规,保护啤酒大麦的生产经营环境,严格管理,规范啤酒大麦种植业和经营市场.