酿酒酵母蔗糖酶基因的克隆、异源表达及重组酶学性质研究

以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到蔗糖酶基因(suc 2),并将其克隆到表达载体pSE380中,将得到的重组质粒pSE-suc 2转化进E.coli BL21中,利用镍金属螯合层析方法分析测定其酶学性质.重组菌株的SDS-PAGE结果显示重组蔗糖酶基因(suc 2)有60kDa目的蛋白出现,纯化的SDS-PAGE分析得到均一的蛋白条带;重组蔗糖酶的Km值为47.73mmol/L,最大反应速率为79.59mg还原糖mg-1蛋白min-1,最适温度为42℃,最适pH值为5.5,Zn2+、Cu2+对重组蔗糖酶酶活有较强的抑制作用,Ba2+、Mg2+、Mn2+对重组蔗糖酶酶活稍有激活作用.
磷脂酰肌醇转运蛋白Sec14是最先在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中发现的磷脂酰肌醇转运蛋白,含有一个典型的SEC14保守结构域.S0ec14p磷脂酰肌醇转运蛋白广泛存在于真核生物细胞中,并参与膜运输途径、质膜发育、脂肪酸代谢、根毛的生长等生命活动,但未见此蛋白在作物逆境胁迫的有关报道.为研究Sec14p基因在小麦(Triticum aestivum)发育及逆境胁迫中的功能,本研究采用电子克隆方法从小麦京花9号中得到一个Sec14p基因,命名为TaSEC14p-5 (GenBank登录号:KU639968).氨基酸序列分析表明,该基因ORF全长为984 bp,编码327个氨基酸,相对分子质量为37.1 kD,理论等电点为7.70.在植物中该蛋白有典型的SEC14类基因家族保守域SEC14和一个CRAL_TRIO_N结构域.进化和聚类分析表明,小麦TaSEC14p-5基因与粗山羊草(Aegilops tauschii)磷脂酰肌醇转运蛋白AeSEC14p基因和水稻(Oryza sativa)磷脂酰肌醇转运蛋白Os02g0200000基因亲缘关系较近,蛋白相似度分别为96.45％和88.38％.采用qRT-PCR技术,对小麦孕穗期不同组织和不同非生物胁迫幼苗进行表达分析.发现该基因在根、茎、叶、颖壳、雄蕊和种子中均有表达,且在茎中表达量较高,雄蕊次之,根最低;该基因受高盐的强烈诱导,同时也受到脱落酸(abscisic acid,ABA) (200μmol/L)、干旱(PEG6000)和低温(4℃)不同程度的胁迫诱导.TaSEC14p-5在NaC1、ABA、PEG和4 ℃四种不同胁迫处理下,总体趋势为先上升后下降.结果推测,TaSEC14p-5基因可能参与了NaC1、ABA、PEG6000和4℃等不同程度的非生物胁迫处理,为进一步改良小麦抗逆性等分子机理研究提供了新的依据.
目的 建立啤酒中甲醛测定的新方法.方法 啤酒中的甲醛与乙酰丙酮反应生成黄色的络合物,用T6新世纪紫外可见分光光度计在410nm处比色定量.结果 该方法的相对标准偏差为1.26％～3.40％,加标回收率为98.6％～102.7％,具有良好的线性范围,r=0.9996.该方法精密度好,准确度高,适用于啤酒中甲醛残留量的测定.结论 我国禁止把甲醛作为食品添加剂,但是有些啤酒生产厂家为了避免啤酒酿造过程中可能出现絮状沉淀,保持啤酒澄清透亮,改善感官质量,在生产过程中有意添加甲醛,因此,对啤酒中甲醛残留量分析就很重要.用乙酰丙酮分光光度法测定啤酒中甲醛残留量的方法完全符合测定要求,且简便、快速、准确,设备简单,价廉,是一种理想的测定方法,易于推广.
一种酱香型白酒酿造槽窖，包括槽窖本体、槽窖上盖、冷却管、加热管、温度传感器、盛放板、设备间、开关、冷却器、控制器、安装支架一和安装支架二；槽窖上盖安装在槽窖本体上部，槽窖上盖盖合时为密封盖合；盛放板设置在槽窖本体内中部，加热管为陶瓷加热管，加热管内部为电加热丝，加热管通过安装支架一安装在盛放板的上方；设备间设置在槽窖本体侧边；冷却器和控制器设置在设备间内部，冷却器为风冷冷却器，控制器为单片机处理、PLC处理器或MCU处理器。该酱香型白酒酿造槽窖能较好的提供了酱香型白酒酿造发酵过程中所需的温度条件，确保了发酵糟醅细菌数量网罗以及营养释放充分，保障了酿酒发酵效率，提高了酱香型白酒生产酿造效率。xa0xa0
将新鲜玉米籽粒加水打浆,经蒸煮糊化、液化、糖化得玉米糖液,再经稀释定型后接种啤酒酵母发酵,最后用玉米香精及甜味剂进行调配,制成一种发酵型的低酒精度玉米汁饮料.研究表明:打浆料水比1:1;煮沸糊化,糊化时间10min;液化温度90℃,α-淀粉酶用量0.08%;糖化温度60℃,时间3h,糖化酶用量为0.02%;定型玉米汁糖度17%;酵母接种量8×106个/ml,主发酵温度15℃,时间5d;后发酵温度4℃,时间10d.最后通过勾兑调味得到的透明饮料不仅具有玉米的香味和营养价值、还具有啤酒的风味与口感.
[目的]研究离子液体1-乙基-3-甲基咪唑磷酸二乙酯磷酸盐([Emim] DEP)对酿酒酵母SY101生长的影响.[方法]用显微镜观察了不同[Emim]DEP浓度下液体培养基中对数生长期酵母细胞的形态及出芽情况,用分光光度法测得的数值绘制出酵母菌24 h生长曲线.[结果]试验发现,[Emim]DEP对酿酒酵母SY101生长有抑制性,随着[Emim]DEP浓度的增加,抑制作用越明显.当[Emim]DEP浓度高于3 g/L时,酵母菌的形态发生明显改变;浓度高于10 g/L时,酵母菌的出芽率明显下降.通过平板培养测得[Emim]DEP对酵母菌的半有效浓度EC50值为6.67 g/L.[结论]研究可为由离子液体从农林废弃物中制备纳米纤维素后的残渣发酵燃料酒精的研究提供基础数据.