酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的信号通路研究

β-防御素是机体的内源性抗菌肽.酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甘露聚糖能够诱导绵羊(Ovis aries)瘤胃上皮细胞(ruminal epithelial cells,RECs)β-防御素-1 (sheepβ-defensin-1,SBD-1)的表达,但是诱导机制尚不明确,限制了甘露聚糖制剂的开发利用.为了探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)信号传导通路(p38,ERK1/2,JNK)和核因子κB (nuclear factor κB,NF-κB)通路是否参与甘露聚糖诱导绵羊RECs SBD-1的表达,首先利用qPCR和Western blot方法检测甘露聚糖对p38、ERK1/2、JNK和NF-κB表达的影响;然后用甘露聚糖分别刺激RECs 5、15、30、45和60 min后,通过Western blot检测p38、ERK 1/2、JNK、IκB和p65的磷酸化水平;最后采用qPCR和ELISA方法检测p38、ERK1/2、JNK和NF-κB的特异性抑制剂对甘露聚糖诱导SBD-1表达的影响.结果 显示,甘露聚糖刺激使RECs中p38、ERK1/2、JNK和NF-KB的mRNA水平以及p38、JNK、ERK1/2、IκB和p65的磷酸化水平均显著提高(P＜0.01);同时,甘露聚糖刺激RECs不同时间可以使p38、ERK1/2、JNK、IκB和p65发生磷酸化;此外,p38、ERK1/2、JNK和NF-κβ的抑制剂均能极显著降低甘露聚糖诱导SBD-1的表达(P＜0.01),且p38抑制剂的抑制效果最明显.上述结果提示,酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊RECs SBD-1表达的过程可能由p38、ERK1/2、JNK和NF-κB信号通路共同调节,并且p38信号通路可能发挥更主要的作用.该研究探讨了甘露聚糖诱导防御素表达的机理,为解释甘露聚糖促免疫功能提供了新线索,也为更好地开发和利用甘露聚糖制剂提供了参考依据.
以酿酒酵母基因组DNA为模板,根据CenBank上公布的酿酒酵母Ravlp基因(rav1)序列和表达裁体特性设计 特异性引物,PCR扩增得到4 074 bp的DNA片段,将PCR产物和原核表达栽体pET28a(+)同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达栽体进行连接,构建成重组质粒pET28a-ravl.再将pET28a-ravl转化到BL21( DE3)感受态细胞中.经IPTG 16℃低温诱导40h表达His-tag融合的Ravlp.诱导后的菌体进行超声波破碎,然后用GE healthcare公司的AKTA蛋白纯化仪和His Trap HP I mL亲和层析柱纯化目的蛋白.SDS-PAGE电泳分析和Western blot分析显示在155 kD有明显的条带,成功实现了Ravlp在大肠杆菌中的表达纯化.
综述了指纹图谱技术在果酒检测中的应用。指纹图谱技术能够客观、准确、快速、安全测定果酒的香气和非挥发性物质。主要介绍气相色谱、液相色谱、质谱等对果酒的分析，同时简单介绍了全二维气相色谱和超高液相两种最新检测技术。指纹图谱技术对建立科学合理的控制和评价果酒质量、防伪等方面的研究提供了理论依据。
利用热重法,研究了3种典型工业污泥(制药,造纸、啤酒)及其混合物在不同影响因素下:热解温度、样品粒度、升温速率、热解压力、添加含金属元素化合物时的热解特性,研究得到热解机理方程式和反应动力学参数.结果表明,热解温度与压力、升温速率、样品粒度和升温速率污泥热解特性有重要影响,特别是添加了含金属元素化合物后,促进污泥热解有明显作用;3种典型工业污泥在低、中、高温段热解反应级数n分别为1,1.5,2.0,其热解特性参数并没有因为工业污泥试样的混合而显著改变;工业污泥热解特性表现出与煤矸石料相同特性,热解初期活化能和频率因子较低,随着热解温度升高,活化能和频率因子均增大,特别是在热解后期,活化能和频率因子都较高.
以鲜奶为主要原料,通过发酵试验和感官评定,筛选出发酵风味好的菌株,探究奶啤饮料的工艺配方并进行奶啤稳定性研究.结果表明:利用啤酒酵母发酵,奶啤风味最好;当酵母接种量为4%,蔗糖添加量为8%,发酵温度为30℃,发酵时间为15 h时生产的奶啤饮料风味最佳,而当CMC添加量为0.5%,黄原胶添加量为0.2%时,稳定性较好.
为了确定酿酒葡萄的水分生产函数,以酿酒葡萄"梅鹿辄"为供试品种,采用滴灌的方式,以不同生育期土壤水分水平为试验因素,对酿酒葡萄不同生育期进行亏水处理,测定不同生育期土壤含水率、耗水量、产量及水分利用效率,研究了不同生育期、不同土壤水分状况对酿酒葡萄耗水量和产量的影响.结果表明,土壤水分对酿酒葡萄产量的影响规律为浆果膨大期最大,其次是开花期、着色成熟期、抽蔓期,萌芽期最小;通过对Jensen模型与Blank模型进行计算比较,发现在该试验中Jensen模型更为合理,且得出不同生育期水分生产函数的敏感指数为:浆果膨大期>开花期>着色成熟期>抽蔓期>萌芽期,与酿酒葡萄耗水规律一致;在萌芽期、抽蔓期及着色成熟期的土壤水分保持在田间持水率的60%~65%左右不会造成酿酒葡萄减产,而在浆果膨大期进行充分供水,既可获得高产,也使水分利用效率达到较高水平.