酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化

以酿酒酵母基因组DNA为模板,根据CenBank上公布的酿酒酵母Ravlp基因(rav1)序列和表达裁体特性设计 特异性引物,PCR扩增得到4 074 bp的DNA片段,将PCR产物和原核表达栽体pET28a(+)同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达栽体进行连接,构建成重组质粒pET28a-ravl.再将pET28a-ravl转化到BL21( DE3)感受态细胞中.经IPTG 16℃低温诱导40h表达His-tag融合的Ravlp.诱导后的菌体进行超声波破碎,然后用GE healthcare公司的AKTA蛋白纯化仪和His Trap HP I mL亲和层析柱纯化目的蛋白.SDS-PAGE电泳分析和Western blot分析显示在155 kD有明显的条带,成功实现了Ravlp在大肠杆菌中的表达纯化.
[目的]微波辅助提取法提取啤酒花多酚,为酒花浸膏的工业化生产提供科学依据.[方法]以多酚含量为响应值,在单因素实验的基础上,筛选出乙醇浓度、微波功率、微波时间三种对提取影响较大的因素,响应面法进行优化,并验证优化方案.[结果]确定酒花多酚最佳提取条件为:乙醇浓度56％,微波功率720 W,微波时间81 s.[结论]在此条件下,提取多酚含量达到81.358 mg/g.
目的 利用毕赤酵母高效表达人组织因子途径抑制因子(TFPI).方法 利用基因定点突变技术对人TFPI cDNA特定序列进行定点突变(同义突变).将获得的突变体及野生型cDNA分别插入表达载体pPic9中,转化酵母宿主菌GS115和KM71,用0.5%的甲醇诱导重组蛋白表达.细胞培养上清经超滤浓缩后,依次用DEAE-sepharose Fast Flow、Heparin-sepharose CL6B及 Sephadex G-75柱层析分离纯化得到重组蛋白,分别采用凝胶扫描成像定量分析和底物显色法测定重组蛋白的表达量和活性.结果 凝胶扫描成像定量分析显示,同义突变体的表达量(1 mg/L)显著高于天然型(0.1 mg/L).活性测定表明GS115重组菌在诱导表达12 h后即可于培养上清中检测到TFPI活性,36 h达峰值;而KM71重组菌诱导表达24 h后才开始于培养上清中检测到TFPI活性,72 h达峰值.两个菌株中突变体mTFPI-pPic9转化子的表达量均显著高于TFPI-pPic9转化子.重组蛋白相对分子质量约为42 000.结论 对TFPI-cDNA特定序列进行同义突变后能显著提高重组蛋白在毕赤酵母细胞中的表达,且显著高于在酿酒酵母和昆虫细胞的表达;重组蛋白具有良好的生物活性.因此,利用毕赤酵母表达TFPI是一种较好的选择.
根据现阶段甘肃省啤酒大麦的生产实际,提出了影响甘肃省啤酒大麦品质的主要因素为品种多、乱、杂,品种布局不尽合理,有效的良种繁育体系及优质栽培体系没有建立,生育后期及收获至制麦前的管理不到位等.
分析了酿酒特色食品生物技术专业的建设情况与人才培养目标,介绍了其基于广泛调研、精准定位的培养方案修订过程,并将其专业人才培养特色定位为"六位一体"的专业能力培养体系、企业参与的实践教学体系、产品为载体的项目化实践教学模式、高效的顶岗实习监控机制.总结了酿酒特色的人才培养模式建设内容,包括专业特色课程体系构建、专业师资队伍建设、实训条件建设.最后介绍了人才培养模式实施效果,主要是践行学校办学定位,培养了一批具有高素质的理论和实践教学师资队伍,使学生受益良多,企业评价较高,承担行业、企业相关人员的培训.
本实用新型公开了一种酒厂用白酒过滤设备，涉及白酒加工领域，其包括固定于底座上的U形安装板、处理箱，U形安装板的内侧固定有固定板，所述U形安装板上转动安装有竖向的转动杆、内螺纹管，内螺纹管位于处理箱的上方，所述转动杆的上端固定有第一带轮，第一带轮通过同步带传动连接有固定套装于内螺纹管上的带轮环，所述转动杆通过齿轮组传动连接有固定于固定板上的驱动电机。本方案通过不仅能够对酒水进行两次过滤，还能对混合物进行压榨，逼出更多的酒水，且在压榨时过滤箱能够转动，从而使得压榨更加充分，且转动的过滤箱能够产生离心力，方便酒水的逼出，使用效果好。xa0xa0