根据裂殖酵母的β-葡萄糖苷酶的基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从裂殖酵母中提取总RNA,然后反转录扩增得到β—葡萄糖苷酶基因（bglA）,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYD1-bglA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,提取酵母菌的DNA通过PCR扩增证实了β-葡萄糖苷酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2％ (w/v)的半乳糖诱导48h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于裂殖酵母的β—葡萄糖苷酶展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析研究.
目的 构建人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7重组全酿酒酵母疫苗.初步评价疫苗的免疫应答效应.方法 将HPV16 E7 cDNA亚克隆入酵母表达载体pYES2/NT,重组质粒转化酿酒酵母,经诱导表达、热灭活制备全酵母HPV16-E7疫苗.疫苗免疫C57BL/6小鼠,ELISA检测其诱导的抗体和细胞因子表达水平.结果 重组全酵母疫苗能够有效地表达HPV16-E7蛋白;疫苗小鼠免疫,能够诱导出特异性抗HPV16-E7抗体,并促进Th1型细胞因子的表达.结论 研究结果 为进一步进行疫苗抗肿瘤免疫研究,提供了实验基础.
ω-3脂肪酸脱饱和酶催化ω-6多不饱和脂肪酸(PUFAs)转化为ω-3 PUFAs,对ω-3长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFAs)的合成至关重要.为了实现在常温下发酵生产ω-3 LC-PUFAs(主要是二十碳五烯酸,EPA),根据现有常温下偏好催化20C PUFAs的ω-3脂肪酸脱饱和酶序列,从GenBank数据库筛选出与之高度相似的序列并进行生物信息学分析.为了确定序列的生物活性,进一步在酿酒酵母系统中进行重组表达,通过外源添加不同碳链长度的脂肪酸底物,测定重组酿酒酵母转化子在28℃和12℃下对不同脂肪酸的转化率.结果显示,新筛选序列编码的蛋白oAiFADS17既能催化18C PUFAs,又能催化20C PUFAs,尤其偏好催化二十碳四烯酸(AA)转化为EPA.oAiFADS17蛋白在28℃下对各种底物的转化率均高于12℃下的转化率,其中对AA的转化率达到46.3％.该研究成功测定了oAiFADS17蛋白对不同脂肪酸底物的转化率,得到了一种新的常温偏好催化20CPUFAs的ω-3脂肪酸脱饱和酶,为构建高产EPA的基因工程菌株及EPA的工业化生产奠定了理论基础.
本文从财务管理目标理论开始，介绍了我国企业财务管理目标的历史演变及现状，以重庆啤酒公司有关财务数据进行案例分析，说明通过分析，企业经营的好坏，都会通过财务管理能力表现出来。
对面向国际的中国白酒文化传播体系及其架构的搭建进行了深度研究。通过对当前中国白酒文化在国际市场中的传播现状进行分析，对中国白酒文化传播体系的传播方式、渠道等多项内容的构建体系进行了挖掘，找出了符合当前国际局势的中国白酒文化传播的有力措施，从而建立具备内涵价值的中国文化传播体系，以期为我国白酒文化的传承和推广带来帮助。
为研究葡萄汁中可同化氮和还原糖对酵母发酵特性的影响,设计150、240、330、420、500 mg/L可同化氮质量浓度和170、200、230 g/L还原糖质量浓度,共计15个处理,测定了模拟葡萄汁酒精发酵过程中酵母生长、还原糖消耗和可同化氮消耗的变化.结果表明,模拟汁中可同化氮质量浓度过低(150 mg/L)则不能充分满足酵母生长的需要,同时限制了酵母的还原糖消耗速率,通过提高初始还原糖质量浓度至200 g/L可促进酒精发酵进行;酵母在初始可同化氮质量浓度高于240 mg/L的模拟汁中可以正常生长,此时初始还原糖、可同化氮质量浓度对酵母生长量均无显著影响,还原糖含量最直接影响酿酒酵母菌株的发酵特性,决定发酵时间长短,表现为在初始还原糖质量浓度较低(170 g/L)的模拟汁中,酵母生长速率随着模拟汁初始可同化氮质量浓度的升高而加快,在初始还原糖质量浓度较高(200～230 g/L)的模拟汁中,酵母生长速率不受初始可同化氮质量浓度的影响;当模拟汁初始可同化氮质量浓度高于330 mg/L时,酵母对可同化氮的消耗开始出现剩余,剩余量随着模拟汁初始可同化氮质量浓度的升高而增加,此时可同化氮质量浓度能够充分满足酵母可同化氮代谢的需要,且酵母对可同化氮消耗量随着初始还原糖质量浓度的增加而略有减少.
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