通过SpyTag/SpyCatcher介导的自发环化提高酿酒酵母S288C中Ulp1的稳定性

SpyTag/SpyCatcher环化技术是一种自发迅速的共价连接反应,通过环化蛋白的骨架以实现目标蛋白的环化,从而提高目标蛋白稳定性.研究显示,SpyTag/SpyCatcher技术介导的环化过程不受环境的影响,不会影响目标蛋白原本的催化活性和功能,且一旦完成便具有极强的稳定性.小泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifiers,SUMOs)是一种十分有效的促溶标签,广泛应用于重组蛋白的原核表达过程中.泛素样特异蛋白酶1(ubiquitin-like-specific protease 1,Ulp1)是SUMO特异性蛋白酶中的一个重要成员,具有将SUMO从目标融合蛋白上切下,不残留任何氨基酸碱基的特异性酶切活性,且参与SUMO的成熟过程,但较差的稳定性限制了其应用.本研究使用截断型Ulp1(Gly304～Lys621)代替全长Ulp1,并对其序列进行了优化,得到了重组截断型Ulp1.重组截断型Ulp1既具有Ulp1全部的酶活性,又能更好地在大肠杆菌(Escherichia coli)中高效表达.本研究设计并表达了重组截断型(recombinant truncated Ulp1-His6,rtUlp1)、SpyTag-rtUlp1-SpyCatcher-His6(crtUlp1)和Spy-TagΔDA-rtUlp1-SpyCatcherΔEQ-His6(lrtUlp1)三种蛋白酶.综合比较3种蛋白酶的最适反应条件以及热稳定性,结果显示,crtUlp1的最佳反应酶切温度比lrtUlp1高10℃,比rtUlp1高5℃.crtUlp1在40℃条件下孵育2 h后仍保留87.3％的相对酶活,lrtUlp1在40℃条件下孵育2 h后仍保留43.69％的相对酶活,而rtUlp1几乎丧失了全部的酶活.且crtUlp1在广泛的酸碱范围内都能保持较高的酶活,而rtUlp1与lrtUlp1只在其最佳反应pH下表现出较高的酶切活性.本研究利用SpyTag/SpyCatcher技术获得了高稳定性的rtUlp1,评价了环化结构对rtUlp1热稳定性的影响以及SpyTag/SpyCatcher技术对rtUlp1热稳定性提高的效果,为获得具有高热稳定性的SUMOs特异性蛋白酶及促溶标签SUMOs的广泛使用提供技术基础.
本发明涉及酿酒技术领域，尤其为一种白酒酿造蒸馏设备，包括承载底板，所述承载底板的基面右侧设置有蒸馏罐，所述蒸馏罐的内部下侧设置有燃烧腔，所述蒸馏罐的内部并且位于燃烧腔的上侧设置有盛水腔，所述蒸馏罐的上侧内部设置有蒸馏腔，所述蒸馏罐的左侧设置有第一蒸馏管，所述蒸馏罐的右侧设置有第二蒸馏管，所述蒸馏罐的上侧设置有罐盖，所述罐盖的基面前端设置有压力表，所述罐盖的基面中间处设置有管道连接座，所述管道连接座的背面连接有蒸馏冷凝管，所述承载底板的基面并且位于蒸馏罐的左侧设置有冷凝罐，通过该白酒酿造蒸馏设备能够对生料和熟料进行蒸馏酿造，适用范围广，并且整体的结构简单，使用方便，酿造效率高。
本申请公开了一种保健型白酒，属于白酒领域，用于保健，其包括酒精度为55~60°的白酒80~90份、皂苷0.5~1份、枸杞5~6份、人参5~8份、低聚异麦芽糖1份、玛卡0.5~2份、肉苁蓉0.5~2份。鉴于上述技术方案，本申请能够实现适当饮酒的时候，对饮酒者的身体机能进行恢复，提高身体机能。
[目的]探索南极假丝酵母脂肪酶B更加经济、简便的固定化方法.[方法]根据南极假丝酵母脂肪酶B的成熟多肽序列,人工合成calb基因.将其克隆到质粒pYD1中的AGA2基因下游,获得的重组质粒pYD1-CALB,转化S.cerevisiae EBY100菌株,并利用酿酒酵母工业化培养基发酵.[结果]成功构建表面展示CALB的酵母工程菌株;重组菌株连续传代10次表达酶活力基本保持不变,具有良好的遗传学稳定性;经工业化培养基发酵优化后,25 ℃发酵48 h,CALB水解活力可达4.25 U/ml,冻干粉活力可达147.82 U/g 干细胞.[结论]利用酿酒酵母表面展示系统固定化南极假丝酵母脂肪酶B具有可行性,且工业化培养基的使用降低了发酵成本.
比较了7种进口葡萄酒活性干酵母产品的质量、对张家口酿酒葡萄汁的发酵性能以及耐SO2和耐高糖的能力.结果表明7种活性干酵母的活细胞率均高于60％,其中LAFFORT VL1的活细胞率最高,达到93％.比较7种进口葡萄酒活性干酵母的发酵性能发现,7种产品均能够启动张家口酿酒葡萄汁的正常发酵,具有良好的耐SO2和耐高糖能力,其中以LALVIN D254和LAFASE F15与张家口酿酒葡萄汁的发酵性能最为匹配,可以用于张家口酿酒葡萄发酵的备选发酵菌剂.该研究为提升张家口地区的葡萄酒品质、风味提供依据.
本实用新型公开了一种白酒蒸馏风冷器，它包括有壳体、支架，其设计要点为壳体的顶部设有轴流风机，壳体的左右两侧设有汽液回流室，壳体内设置有翅片散热管，该散热管的端口与壳体的左右两侧的汽液回流室相连通，壳体一侧的上部设有与翅片散热管连通的集气箱，该集气箱上设有蒸汽接口，壳体一侧的下部设有与翅片散热管末端连通的出液管。本实用新型通过利用流通空气作为热交换介质，解决了白酒蒸馏过程的冷却问题。其不仅热交换效率高，且结构简单实用，同时无需消耗水资源，因此本实用新型属于一款新型的环保型白酒蒸馏器。