人生长激素的酵母/哺乳动物穿梭载体的构建

目的酿酒酵母已被证实可作为载体应用于口服基因治疗及免疫中.为研究人生长激素(HGH)以酿酒酵母作为运送载体的口服基因药物,需要构建一种能够在酵母中复制而在哺乳动物细胞表达的HGH穿梭载体.方法利用ECHO克隆系统先构建出HGH的哺乳动物表达载体,使HGH处于CMV启动子的调控下;然后设计引物扩增CMV-HGH片段,连接到酿酒酵母表达载体pESC-URA中,构建HGH的酵母/哺乳动物穿梭载体.结果经EcoRI单酶切、EcoRI/SpeI双酶切、菌落PCR以及序列测定鉴定,确认所构建的确为酵母/哺乳动物穿梭载体pESC-CMV-HGH.结论成功构建的穿梭载体可在酿酒酵母中复制,在哺乳动物中受CMV启动子的调控进行表达,为HGH的口服基因药物研制打下了基础.
为优化超声波辅助液-液萃取(LLE)结合气相色谱(GC)检测酿酒酵母菌株合成单萜化合物的工艺条件,本试验以模拟葡萄汁为原料,研究超声功率、超声时间、NaCl添加量和萃取剂体积对萃取效果的影响,在单因素试验的基础上,采用响应面试验优化超声辅助萃取模拟葡萄酒中单萜化合物的萃取工艺.结果 表明,模拟葡萄汁单萜类化合物最佳萃取工艺参数为,超声功率405 W、超声时间15 min、NaCl添加量4.9 g、萃取剂体积15.5 mL,在此萃取条件下结合GC可从模拟葡萄汁发酵酒样中检测出芳樟醇、α-萜品醇、香茅醇、香叶醇4种单萜物质,总含量高达46.29 μg·L-1,进一步证实了酿酒酵母可以从头合成单萜化合物.本研究结果为深入探究酿酒酵母菌株单萜化合物合成代谢机制提供了理论依据.
在充分了解原产于南方野生葡萄资源酿造加工及选育种研究的利用价值基础上,全面分析了南方发展酿酒葡萄的优势与存在问题,总结多年的实践经验和教训,并提出了实现南方湿热地区酿酒葡萄品种遗传改良并推动其产业化发展的具体对策和建议.
产土味素(geosmin)的链霉菌对白酒酿造菌群及风味造成严重影响.该研究目的是发现白酒酿造中限制土味素生物合成的特征环境因子.针对白酒群体微生物固态酿造体系的特征,系统地研究了酿造环境因素(温度、水分、乙醇含量、pH等)对产土味素链霉菌生长及代谢的影响规律.研究发现土味素的产量与菌体的生物量和生长速率是呈正相关的关系.发现产土味素链霉菌最适生长温度为30℃,最适生长的基质含水量为50％.乙醇体积分数高于10％的酿造环境中,产土味素链霉菌菌体生长会受到完全抑制.菌体在中性偏碱性(pH7～8)的环境中可以大量繁殖.在酸性(pH3～5)环境中,产土味素链霉菌菌体生长受到抑制,并进而减少土味素的产生.研究结果对有效控制白酒中土霉异味提供了可靠的理论依据.
新疆沿天山北坡地区是我国重要的葡萄产区，本文对当地主栽品种的病虫害发生情况、发病规律以及防治方法进行了实地调查，发现北疆酿酒葡萄的虫害主要是葡萄毛毡病，红提葡萄病理性病害主要是白粉病和霜霉病以及生理性病害日灼病。针对调查结果，总结出一套北疆地区酿酒葡萄和红提葡萄病虫害的综合防治措施。
脂肪酸及其衍生物具有广泛的应用前景,特别是作为先进燃料能够缓解目前全球范围内的能源危机与环境污染问题.从微生物出发,利用生物发酵的方法生产脂肪酸及其衍生物被认为是一种可再生且环境友好的生产模式.随着酵母细胞研究的不断深入以及基因操作平台的日益完善,酵母细胞工厂成为继大肠杆菌细胞工厂之后又一脂肪酸类化合物的高产平台,也在其工业化进程的不断推动下面临着前所未有的机遇与挑战.因此,本文中,笔者综述了近年来以酵母细胞(主要包括酿酒酵母、解脂耶氏酵母和圆红冬孢酵母)为宿主菌构建的细胞工厂在生产脂肪酸、脂肪醇和烷烃方面的研究进展.同时,提出了提高酵母产脂肪酸及其衍生物产量的基本合成生物学策略,为其进一步的研究和工业化进程奠定良好的理论基础.