无花果曲酶植酸酶基因phyA的克隆、序列分析及表达

用RT-PCR方法从无花果曲酶(Aspcrgillus ficuum 3.4322)中扩增出1条约1.4kb的特异性条带,并将其克隆到pMD18-T载体中.DNA序列测定表明,目的片段为不含信号肽的植酸酶编码序列,全长1 347bp,编码448个氨基酸.该基因序列已在GenBank注册(注册号为:AF537344).将该基因克隆到酵母表达载体pYES2中,构建成不带信号肽phyA基因的重组表达载体pYPA2.用醋酸锂法将pYPA2转进Ura缺陷型的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeINVScl),筛选获得含植酸酶基因的酵母转化子.经半乳糖诱导表达后,用磷钼蓝显色(AMES)法对酵母菌体进行酶活性测定,测出了明显的植酸酶活性,pYPA2胞内植酸酶活性约11.55U/L,表明无花果曲酶phyA基因能在酿酒酵母中表达.
蛋白酶A(PrA)是啤酒酵母体内一种重要的蛋白酶,参与液泡中多种酶的加工和成熟过程.本文主要研究蛋白酶A对酿酒酵母抗逆生理代谢性能抗不良环境的特性.试验结果表明蛋白酶A缺失对啤酒酵母生长性能、低氮耐受能力、抗氧化能力和高酒精度耐受能力均有显著影响.
本发明公开一种生产麸曲白酒的新方法，属于酿酒技术领域。包括如下步骤：原料粉碎，润料，蒸料，培菌糖化，配糟发酵:培菌糖化好的料醅，拌入配糟2，配糟2中原料︰新鲜酒糟为1︰2.0?3.0，以配料后物料粗淀粉含量16％?21％、水分含量58?63％、酸度0.6?1.0为宜，于28?36℃下发酵3?7天；蒸馏:发酵成熟的酒醅直接装甑蒸馏，截头去尾即得麸曲白酒基酒。本发明在保留麸曲白酒出酒率高、发酵周期短的同时，大幅度提高麸曲白酒中香味成分的含量，从而显著提高麸曲白酒的质量。
目的：整理归纳古代本草对于六神曲文献记载及现代研究成果，思考六神曲发酵机理研究方向，为六神曲工艺规范化研究提供思路。方法：按照年代梳理六神曲古代文献，并参考当时的农艺等杂项书籍作为佐证，梳理六神曲名称、制备方法、药物功效等记载，追溯六神曲出现的背景，从六神曲名称的由来推测其炮制原意，进而结合现代研究文献，对六神曲的发酵机理研究提出自己的推论和思考。结果：通过文献整理，认为六神曲来源于古代酒曲，其“神”字由其酿酒效率高而来，由于用途不同，其制法逐渐脱离酒曲，微生物种类变化和鲜药材的加入，都与增强消食疗效有关。
目的 观察高、中、低不同剂量的某酱香型白酒对大鼠乙醇脱氢酶(ADH)、乙醛脱氢酶(ALDH)含量的影响,以探讨该酒与体内乙醇代谢的关系.方法 75只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组,乙醇组,白酒高、中、低剂量组,分别给予大鼠灌胃生理盐水5 mL/kg,乙醇5 mL/kg,某酱香型白酒10、5、2.5 mL/kg,1次/d,连续7 d.末次灌胃12 h后处死大鼠,检测大鼠血中乙醇、乙醛浓度,肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、ADH、ALDH含量,RT-PCR、免疫组织化学法和Western blot检测大鼠肝组织中ADH1、ALDH2 mRNA及蛋白质的表达.结果 与乙醇组比较,末次灌胃12 h后白酒中、低剂量组大鼠血中乙醇、乙醛浓度明显降低(P<0.01);在大鼠肝匀浆中,白酒高、中、低剂量组SOD、GSH-PX含量均明显升高(P<0.01),白酒中、低剂量组MDA含量明显降低(P<0.01),白酒低剂量组ADH含量明显升高(P<0.01),白酒高、中、低剂量组ALDH含量均明显升高(P<0.01);肝组织中,白酒低剂量组ADH1 mRNA及蛋白质表达明显升高(P<0.01),白酒高、中、低剂量组ALDH2 mRNA及蛋白质表达均明显升高(P<0.01).结论 该酱香型白酒对大鼠ADH的影响与乙醇无明显差异,但可明显升高大鼠ALDH活性,从而减少乙醛在体内的蓄积,减轻乙醛对机体的毒害作用.
用结晶致孔法制备了内嵌SiO2颗粒的聚甲基丙烯酸羟乙酯基复合晶胶，经甲基丙烯酸二甲氨乙酯接枝修饰后，得到了阴离子交换复合晶胶介质，用于从啤酒酵母转化液中色谱分离三磷酸胞苷。色谱分离过程以0.01 mol·L-1 HCl为平衡液，以0.02 mol·L-1和0.1 mol·L-1的NaCl溶液（用平衡液配制）分步洗脱。通过高效液相色谱定量分析，所得三磷酸胞苷的纯度达97.2%，回收率82.5%。与其他分离方法相比，本法过程简单、分离迅速高效，在核苷酸药物的分离领域具有很好的应用前景。