乙醛脱氢酶的克隆表达及其酶学性质

将GeneBank中人源乙醛脱氢酶2的基因序列根据酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的密码子偏好性进行密码子优化后合成目的基因ALDH2,采用融合PCR技术,构建人源ALDH2基因的表达组件TRP1L-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-TRP1R.通过电转化的方法将基因表达组件通过同源重组整合到酿酒酵母W303-1A的基因组上,获得基因工程菌W303-ALDH2.工程菌发酵后的粗酶液经His TrapTM excel亲和层析柱纯化获得重组AL-DH2,其活性为20.70 U/mg;重组酶的相对分子质量是56 kDa;最适反应pH和温度分别为5.0和35℃;除Na+外,K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+均能不同程度地提高ALDH2的酶活.以乙醛为底物测得酶的Km值为0.908 mmol/L,最大反应速度Vmax为114.94 U/mg;以辅酶NAD+为底物测得酶的Km值为0.282 mmol/L,最大反应速度Vax为58.82 U/mg.
本发明涉及人们日常生活中饮用的白酒，尤其是一种稻浆白酒，一种稻浆白酒是由：再生水稻含稻浆的稻穗、白糖、野生酵母进行发酵、蒸馏、酿造而成的；再生水稻是采用收割后的水稻根，在有水和适合的温度下再次生长出来的水稻，这种水稻的稻穗在灌浆后进行收割；由于再生水稻的生长环境不含有任何肥料和除草、除虫剂，不会影响到人体的健康，因此饮用这种稻浆酒更有利于人们的健康，是人们在日常生活中饮用的绿色白酒。
探究桑椹果酒发酵过程中挥发性物质变化情况,采用顶空固相微萃取结合气相色谱质谱联用技术(SPME-HS-GC-MS)研究桑椹果酒不同发酵阶段挥发性风味物质组成情况,并对风味成分的相对含量进行主成分分析.结果从不同发酵阶段桑椹果酒中共检测出35种挥发性风味物质,其中醇类11种,酯类6种,烷烃类4种,醛类2种,烯烃类3种,酮类1种,其他化合物类8种,经主成分分析综合评价,发酵第6d的桑椹果酒风味最佳.
为研究栽培措施对酿酒葡萄脂肪酸组分的影响,以欧亚种(Vitis vinifera L.)酿酒葡萄品种赤霞珠(Cabernet Sauvignon)、霞多丽(Chardonnay)为实验材料,通过植物生长调节剂、摘叶、机械损伤、套袋、不同采收时间等方式进行处理分析.结果表明:葡萄果皮不饱和脂肪酸主要由亚油酸、油酸、棕榈油酸组成;亚麻酸未检测出;饱和脂肪酸主要由棕榈酸、硬脂酸、山嵛酸、花生酸组成.脱落酸、茉莉酸甲酯、光照强度、采收时间、机械损伤处理能够影响亚油酸的含量,并且这种影响与品种有关.在两个品种葡萄果皮中,都发现了呈显著正相关的月旨肪酸组分,但品种间差异较大;在霞多丽葡萄果皮中,呈显著正相关的脂肪酸组分明显多于赤霞珠;并且,饱和脂肪酸之间的相关性强于不饱和脂肪酸之间的相关性.结果将为改善葡萄果皮脂肪酸组分,进而提高果实品质提供理论依据.
采用阴离子分离柱YSA8 8022A-9(250 mm×4 mm i.d.)分离，电渗析抑制器和电导检测器检测,以2.4 mmol/L Na2CO3-3 mmol/L NaHCO3(体积比为2∶1)为流动相，以保留时间和标样添加法定性，标准曲线法定量，测定了啤酒及其酿造水中的无机阴离子。方法操作简便、快速，结果准确、可靠。
为研究两种酵母在混合培养条件下各菌株生长相互影响的因素,以纯培养为对照,研究两种酵母菌酿酒酵母(简称Sc)和东方伊萨酵母(简称Io)氨基酸代谢的差异,探讨差异氨基酸对Sc生长的影响.结果表明,Io与Sc混合培养体系与Io纯培养体系氨基酸代谢情况相似度较高,且多数氨基酸(包括天冬氨酸、脯氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸)含量较Sc纯培养时高,而Sc代谢精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、苏氨酸的速率较Io纯培养体系及混合体系时慢,且Io纯培养通过代谢生成的组氨酸、酪氨酸较Sc纯培养多,最高分别比Sc高出1.86,3.17倍.缺少精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸和苏氨酸及添加组氨酸会对Sc的生长产生显著抑制,表明混合体系中Sc生长受到抑制的原因一方面是因为Io代谢精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸和苏氨酸的速率较Sc快,导致混合体系中Sc对这几种氨基酸的吸收不足,从而导致生长受到抑制,另一方面是Io生成的组氨酸对Sc生长产生抑制.