人雌激素受体cDNA在酵母细胞中的表达

根据人全长雌激素受体cDNA序列,用RT-PCR方法使乳腺癌细胞MCF-7株扩增人雌激素受体基因(hER-cDNA),通过pGEM-T/hER载体克隆到酵母表达载体中,并转化到酿酒酵母细胞中,用Western blot法和免疫组化法检测hER cDNA的表达. 结果表明:hER cDNA在酵母细胞中成功表达, 可用于建立环境雌激素的酵母细胞检测体系.
为探究丙酮酸羧化酶及微量元素Ca2和生物素对酿酒酵母积累琥珀酸的作用,敲除了琥珀酸脱氢酶编码基因(SDH2)并过量表达来自米根霉的丙酮酸羧化酶基因(RoPYC).琥珀酸产量由(0.011±0.002) g/L提高至(0.841±0.020) g/L,较表达前提高了75.45％.随后,外源添加不同浓度Ca2+和生物素考察其对琥珀酸发酵的影响,结果发现,Ca2+的添加促进了菌体的生长但不利于琥珀酸的积累,而外源添加浓度为16、32、64、96μg/L生物素时,琥珀酸产量分别提高75.04％、84.26％、69.28％、66.79％.其中生物素质量浓度为32 μg/L时,琥珀酸产量达到最大为(0.964±0.02)g/L,且丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase,PC)酶活提高14.42％,说明PC酶活的提高促进了酿酒酵母中琥珀酸的积累.该研究为解决酿酒酵母琥珀酸合成过程中前体碳代谢流不足问题提供了新的解决思路.
红曲霉对红曲黄酒的色、香、味及其功能性组分至关重要.然而,红曲霉在酿酒过程中被抑制,其抑制机理并未明确.本研究采用PCR-DGGE与qPCR技术相结合的方法,对平湖红曲黄酒传统酿造过程中的优势真菌菌群动态进行定性、定量分析,并根据红曲霉的菌量变化推测可能原因,同时构造相应的体系进行验证,寻找影响红曲霉生长的关键因子.结果表明:传统酿造过程中,红曲霉和酿酒酵母是优势菌,且随着酿造时间的延长,红曲霉的菌量逐渐降低;验证体系表明溶氧量的暂时减少、红曲米的物理束缚和红曲浸泡液中的物质并不会显著抑制红曲霉的生长,而酒精度的增加是影响红曲霉生长的关键因素;传统酿造过程进一步验证酒精度的变化与红曲霉生长的关系,发酵初期的酒精度(0～4％,体积分数)对红曲霉无影响,而随着酒精度的增加,红曲霉的生长逐渐受到抑制,至发酵后期的酒精度(17％,体积分数)对红曲霉的抑制作用明显.
metacaspase介导的程序性细胞死亡在植物生长发育、抵御生物和非生物胁迫过程中发挥重要作用.前期研究发现橡胶树metacaspase基因HbMC2的表达受干旱和高盐等非生物胁迫调控.为明确HbMC2的功能,采用RT-PCR从橡胶树中扩增HbMC2编码区序列并将其插入到pYES2载体中,构建酵母表达载体pYES2-HbMC2.将pYES2-HbMC2质粒转化到酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES2-HbMC2).PCR及RT-PCR检测结果表明,HbMC2已成功转入重组酵母并能在半乳糖诱导下表达.与对照酵母INVSc1(pYES2)相比,重组酵母INVSc1(pYES2-HbMC2)在氧化、干旱和盐胁迫下的生长受到抑制、细胞死亡率增加.结果表明酵母中表达HbMC2降低了对非生物胁迫的抗性,HbMC2是非生物胁迫抗性的负调节因子.
为了得到高产胞外β-葡萄糖苷酶的酿酒酵母(Saccharomycaes cerevisiae)菌株,采用紫外线诱变技术对菌株MQFSM-3进行处理,研究了紫外诱变条件对菌株致死率的影响,并对突变菌株酶活及酶学性质进行评价.结果表明,出发菌株在辐照剂量为3500 μJ/cm2的紫外灯下照射9 min,致死率为81.09％;通过初筛、复筛及多次传代培养,突变菌株UV-45产酶稳定,酶活提高41.64％,该酶最适温度为50℃,在20～50 ℃热稳定性良好;最适pH为5.5,在pH4.0～6.5酶活力相对稳定.
本发明公开了一种高膳食纤维含量的鹿茸黄酮白酒，由下列重量份的原料制成：菊花瓣28?32、小麦180?200、红薯粉90?100、荷叶16?20、龙胆草4?6、覆盆子8?10、魔芋粉15?17、鹿茸24?25、硫酸铵1?2、黑皮油松松针37?40、50%乙醇溶液适量、水适量；本发明白酒在菊花瓣、魔芋粉的加入下，其中大量的可溶性膳食纤维不参与白酒酿造的发酵过程，并在白酒体系中交织形成网络结构,能均匀溶解分散在白酒中，经饮用后提高人体每日对膳食纤维的摄入量，对于增进人体健康有着较好的功效。