小金海棠质膜H+-ATPase基因(MxHA2)的克隆及功能分析

植物质膜H+-ATPase能把质子泵出根外酸化土壤,增加铁的溶解度,利于植物对铁的吸收.小金海棠是一个苹果铁高效基因型砧木,为研究质膜H+-ATPase在小金海棠铁吸收过程中的功能,本研究通过同源克隆的方法从小金海棠(Malus xiaojinensis)中克隆到了一条全长2865 bp含有完整编码区的质膜H+-ATPase基因(MxHA2),编码954个氨基酸(GenBank登录号:JQ867095).系统进化分析结果表明MxHA2蛋白与碧桃(Prunus persica)的PPA2蛋白亲缘关系较近.基因枪法在洋葱(Allium cepa)表皮内进行亚细胞定位分析,结果表明,MxHA2与GFP的融合蛋白定位于细胞膜上.荧光定量PCR分析表明,缺铁胁迫后,MxHA2基因在根和叶中均有不同程度的增强.把MxHA2基因转化到酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(BJ2168)后,转MxHA2的酿酒酵母H+-ATPase活性极显著增强,且缺铁处理后其生长量持续高于对照,表明该基因编码的蛋白具有H+-ATPase活性,其过量表达能提高酵母菌株的耐缺铁性.结果提示,MxHA2可能在小金海棠的耐缺铁胁迫过程中起重要作用,为进一步研究小金海棠的铁高效机理提供了依据,在果树耐缺铁分子育种上有重要的应用前景.
发明提供一种利用废弃酒糟生产白酒的方法，1、取玉米粒加入清水煮至糊状，冷却常温后，加入糖化酶混合均匀，封闭6～8小时待用；2、将新鲜酒糟散热至常温待用；3、按酒糟重量取20％重量份的稻谷壳放入酒甑中蒸20分钟取出散热至常温待用；4、将1、2、3物料混合均匀，按总重量取60％重量份的常温清水加入混合拌匀；5、放入发酵池密闭发酵15天；6、按正常蒸馏方式提取白酒即为成品。本发明通过上述方法，将放酒后的酒糟，再次利用生产白酒，所产酒味纯正，入库时将头、尾酒勾兑，使之成为50°左右的白酒，具有利用废弃物料，工艺方法简单和成本低、效果好的特点。
目的在酿酒酵母AH109中表达柯萨奇病毒B3型VP1基因,并检测VP1蛋白对报告基因的转录自激活作用.方法用乙酸锂法将重组柯萨奇B3病毒VP1基因的细菌-酵母菌穿梭载体pGBKT7-VP1转化酵母菌.通过表型鉴定、PCR法验证质粒导入宿主菌后,Western blotting验证VP1蛋白的表达,最后经营养缺陷培养基和酶底物X-α-Gal反应检测VP1基因对报告基因的转录自激活作用.结果表型鉴定和PCR法均证实pGBKT7-VP1质粒转入酵母菌成功,Western blotting证实AH109能表达VP1蛋白,营养缺陷型培养基和酶底物X-α-Gal反应结果显示VP1蛋白对3种报告基因均无转录自激活作用.结论柯萨奇病毒B3 型VP1蛋白可作为酵母双杂交系统的诱饵蛋白,为筛选与其相互作用的宿主细胞蛋白提供了基础.
为比较海南苦丁茶、白沙绿茶、大叶种茶及鹧鸪茶4种茶水提物的抗氧化及抑菌活性,本实验通过水浸提法获得4种茶的水提物,利用分光光度法测试其体外抗氧化活性;并以5株酿酒酵母及5种致病细菌为靶标,分别测定了4种茶水提物的抗氧化活性及抑菌活性.结果表明:苦丁茶、白沙绿茶、大叶种茶及鹧鸪茶水提物的提取率分别为29.31％、23.02％、27.07％和16.18％;总多酚含量分别为(251.48±12.30)、(315.05±10.98)、(395.05士27.70)、(420.05±25.65) mg GAE/g DW;总黄酮含量分别为(691.60±19.47)、(292.60±18.36)、(524.93±1.53)、(217.60±7.00) mgRE/g DW;4种茶的总抗氧化能力结果由强到弱为:大叶种茶＞鹧鸪茶＞白沙绿茶＞苦丁茶;特别是鹧鸪茶和大叶种茶对二苯基苦酰肼基(Diphenyl picryl hydrazinyl radical,DPPH)自由基、2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)自由基及超氧阴离子的清除率均高于标准品芦丁和特丁基对苯二酚(Terbutyl hydroquinone,TBHQ).同时4种茶对H2O2氧化应激胁迫下的5株酿酒酵母模式菌株的存活率均有提高,其中苦丁茶对基因缺陷型菌株gsh1△的存活率提高最明显,为30.21％.4种茶对致病细菌有较好的抑制作用,其中大叶种茶对金黄色葡萄球菌抑制效果最优,最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)为1.56 mg/mL.由此表明,4种茶水提物具有不同的抗氧化活性和抑菌活性,且多酚含量与活性之间具有较好的相关性.
[目的]运用高光谱成像技术检测成熟期酿酒葡萄果皮的花色苷含量.[方法]利用900～1 700 nm近红外高光谱成像和多元回归模型对多品种酿酒葡萄成熟期不同阶段果皮花色苷含量进行预测建模.采集成熟期4～5个阶段的6个品种共75组酿酒葡萄样本的高光谱图像,运用不同预处理方法对光谱数据进行处理.基于主成分分析(PCA)和连续投影法(SPA)降维,将化学方法测量结果作为花色苷含量的参考值,采用支持向量回归(SVR)建立花色苷含量预测模型.[结果]SPA-SVR模型性能优于其他模型,其预测决定系数(R2P)为0.869 1,均方根误差(RMSEp)为0.135 9.[结论]将近红外高光谱成像技术应用于多品种成熟期酿酒葡萄果皮的花色苷含量的快速无损检测具有良好的可行性.
作为中国包装业顶级盛会，“第十九届中国国际包装工业展”再度吸引了国内外食品、啤酒、饮料、日化及医药等企业客户的目光。气势非凡的展馆内不乏熟悉的身影，