菠菜乙醇酸氧化酶的酶学特性及同工酶电泳分析

为了解析菠菜乙醇酸氧化酶(SpGLO)的酶学特性及同工酶谱.首先提取菠菜的RNA并反转录成cDNA,通过NCBI数据库中提供的菠菜GLO基因mRNA序列信息,设计特异性引物,扩增目标序列并连接到pMD19-T载体上进行测序鉴定;随后再次设计引物并在上游引物加入His标签,克隆SpGLO基因构建到pYES2载体上,将该载体转入酿酒酵母中进行表达并通过His-tag亲和柱纯化,然后在不同诱导时间点取样测定SpGLO酶活.结果显示,转化后的酿酒酵母菌株在诱导发酵20 h后能得到最高的GLO活性.以乙醇酸为底物测定SpGLO在不同pH、不同温度条件下的催化活性,其最适pH值为8.0,最适温度为39℃.然后分别以乙醇酸、乙醛酸、甘油酸为反应底物,系统分析了SpGLO的酶学特性,数据显示,SpGLO对乙醇酸的亲和力最高,其Km为0.41 mmol/L,Vm为45.92μmol/(min·mg).以乙醇酸、乙醛酸为底物,使用草酸抑制其催化活性,其Ki分别为4.61,2.09 mmol/L,表明以乙醛酸为底物时SpGLO的催化活性更易被草酸抑制.同时将纯化后的SpGLO通过Caps-氨水电泳体系进行同工酶电泳,经过染色后出现2条同工酶带,表明菠菜叶片中可能存在2种GLO同工酶.为将来深入研究植物GLO同工酶之间的生化特性差异并分析其不同生理功能奠定良好的基础.
本发明涉及白酒生产技术领域，具体涉及一种富含锌、硒白酒加工方法。具体步骤为：将牡蛎接种内切右旋糖酶酶解后，超声处理，将大蒜切碎中温、高压处理，将处理得到的牡蛎、大蒜与白酒混合，装入有磁性材料制成的密封容器中，在高斯的强磁场中处理140?160分钟，对处理得到的白酒滤过、封装。处理后白酒中的锌、硒的含量得到显著提高，饮用口感极佳，保健价值较高。
本试验对泾阳县龙泉乡、蒋路乡和白王镇3个地点主要酿酒葡萄品种赤霞珠(Cabernet Sauvignon)、蛇龙珠(Cabemet Gernischet)、北醇(Beichun)和桑娇维塞(Sangiovese)的果实品质进行了研究,并利用层次分析法对供试葡萄品种的综合品质进行了评价,主要得到以下结果: (1)不同立地条件下赤霞珠果实品质存在差异,龙泉乡最好,其次是白王镇,蒋路乡最差. (2)相同立地条件下不同品种果实品质亦有差异,龙泉乡赤霞珠果实品质优于桑娇维塞,而蒋路乡和白王镇的赤霞珠果实品质分别低于蛇龙珠和北醇,其中蒋路乡蛇龙珠品质远远高于其它品种. (3)各因子对酿酒葡萄果实综合品质影响的大小为含糖量>糖酸比>单宁含量>pH.果实综合品质最好的是蒋路乡的蛇龙珠,最差的是白王镇的赤霞珠,其它为龙泉乡的桑娇维塞>龙泉乡的赤霞珠>蒋路镇的赤霞珠>白王镇的北醇. (4)泾阳县应优先发展蛇龙珠和桑娇维塞,同时要做好小区域的选择,赤霞珠和北醇在本实验条件下表现一般.
研究了水/有机溶剂两相体系中,酵母细胞转化L-苯丙氨酸(L-phe)生成2-苯乙醇(PEA)的过程.菌种选择表明酿酒酵母CICIM Y0086(T)的转化能力要高于马克斯克鲁维酵母AS.2.1440,有机溶剂的选择表明,在实验使用的4种有机溶剂中,油酸为该反应最适有机溶剂.当初始底物浓度为6 g/L、水和油酸的相体积比为1:1、反应温度30 ℃和pH值4.0、装液量20 mL/250 mL 的条件下,转化48 h,产物浓度达到3.0 g/L,比单水相提高了50%.
本试验旨在研究不同蛋白质源部分替代鱼粉对褐点石斑鱼幼鱼生长性能、体组成以及血清生化指标的影响.配制5组等氮等能饲料,对照组饲料(D1)含68％的鱼粉,试验组饲料(D2～D5)是在对照组饲料的基础上分别用豆粕替代10％的鱼粉、豆粕替代20％的鱼粉、啤酒酵母替代10％的鱼粉、玉米蛋白粉替代10％的鱼粉.选取体重在15 g左右的褐点石斑鱼幼鱼180尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复12尾.试验期为8周.结果表明:在生长性能方面,与对照组相比,D2、D3组的增重率、摄食率、特定生长率、粗蛋白质表观消化率差异不显著(P＞0.05),而D4、D5组的上述指标均显著降低(P＜0.05).与D2、D3组相比,D4组的特定生长率显著降低(P＜0.05),肝体指数显著升高(P＜0.05)；D5组的摄食率、特定生长率、蛋白质效率和粗蛋白质表观消化率显著降低(P＜0.05),饲料系数、肝体指数显著升高(P＜0.05).在体组成方面,D5组全鱼和肌肉中粗蛋白质含量显著低于对照组和D2、D3组(P＜0.05)；D4组肌肉中粗脂肪含量显著低于对照组和D2组(P＜0.05).在血清生化指标方面,D3组血清总蛋白、球蛋白、葡萄糖含量显著低于对照组(P＜0.05),而白球比显著高于对照组(P＜0.05)；对照组、D4组血清甘油三酯含量显著高于D3、D5组(P＜0.05)；各组间血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性没有显著差异(P＞0.05).由此得出,作为鱼粉的替代品,豆粕比啤酒酵母和玉米蛋白粉能更好地满足褐点石斑鱼幼鱼的营养需求；从主要生长指标不受影响的角度考虑,褐点石斑鱼幼鱼饲料中可以用豆粕替代20％的鱼粉.
以啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) W作为出发菌株,用亚硝酸和紫外线连续诱变,在含双乙酰150 μg/mL(亚硝酸诱变)或200 μg/mL(紫外线诱变)的麦芽汁琼脂平板上分离抗双乙酰的菌株,通过三角瓶发酵筛选得到一株优良的啤酒酵母菌株UN41.该菌株在500 mL三角瓶装300 mL 12°Bx麦芽汁的培养基中,12℃下发酵8 d,发酵液的发酵度为65.0%;双乙酰、高级醇和乙醛的含量分别为0.076 8 mg/L、92.15 mg/L和9.33 mg/L,比出发菌株W的降低了37.6%、19.9%和27.6%.