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鲤春病毒血症病毒糖蛋白酵母表面展示系统的建立

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-22 阅读:319
糖蛋白(Glycoprotein,G)作为鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)主要的抗原蛋白,已成为现阶段SVCV病毒检测、抗体制备以及疫苗研制的热点.为了对其进行酵母表面展示,研究以SVCV-shlj1分离株基因组为模板,通过RT-PCR技术,体外扩增获得SVCV表面糖蛋白的基因开放阅读框(1530 bp)片段,将其克隆至酵母表面展示载体pYD1,构建重组质粒pYD1-G.利用电转化方法将重组质粒pYD1-G导入酿酒酵母EBY100感受态细胞,经YNB选择培养基筛选和菌液PCR的鉴定,挑选出阳性转化子(命名为EBY100-pYD1-G),对其进行2%半乳糖诱导.利用细胞免疫荧光和流式细胞仪检测G蛋白的酵母表面展示情况.细胞免疫荧光结果显示,诱导后的酵母细胞EBY100-pYD1-G能产生特异性红色荧光,且随着诱导时间的增加,红色荧光的酵母细胞所占比例不断增加,各组之间差异显著(P<0.05).流式细胞仪检测结果显示,酵母细胞的荧光强度与诱导时间呈正比,其中诱导48h与72h的酵母细胞荧光强度不存在显著差异,基本趋于稳定不变的状态.因此,选取诱导48h为酵母表面展示的最佳诱导时间.上述研究结果表明SVCV的G蛋白已经成功展示于酿酒酵母细胞表面,研究为鲤春病毒血症酵母口服疫苗的研发奠定了前期基础.
本文利用甲醇溶剂对酿酒葡萄皮渣进行浸提,得到白藜芦醇粗提物.粗提物通过硅胶柱层析进行纯化.然后,研究了白藜芦醇的氧自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基、DPPH自由基的清除能力.结果显示:白藜芦醇具有很强的自由基清除能力和抗氧化能力,并且随着浓度的增加,抗氧化能力增强.
采用NaOH法、加热法、蒸汽法、离子交换法4种方法分别提取啤酒厂的剩余活性污泥的胞外多聚物(EPS),并研究其絮凝性能及对污泥的调理作用.结果表明NaOH法提取剩余污泥的EPS絮凝率45.4%, EPS能改善污泥沉降性能,且NaOH法提取的EPS可以使污泥的比阻下降15.2%,加快污泥的过滤速度,从而利于污泥的脱水性能.
中国联合装备集团公司与德国慕尼黑国际博览集团首度合作,携手打造的亚太地区规模最大的2012(第十届)中国国际啤酒、饮料制造技术及设备展览会(CBB2012),在北京中轻合力国际展览有限公司与慕尼黑展览(上海)有限公司有效运作下,经过近两年的精心准备,将于2012年9月19日至22日在北京中国国际展览中心(新馆)震撼登场,为业界构建世界顶级的商务交流平台。
本发明涉及浓香型白酒糟醅长发酵期增香方法,属于酿酒技术领域。本发明所解决的技术问题是提供了一种浓香型白酒糟醅长发酵期增香的方法。本发明浓香型白酒糟醅长发酵期增香方法,包括如下步骤:糟醅入窖发酵20~40天后,取出,每立方米糟醅中分别加入曲药8~12kg、55°~65°的白酒25~35kg、黄水8~12kg、尾水8~12kg,混匀,入窖继续发酵250~350天,糟醅出窖,蒸酒,得到浓香型白酒。
为研究两种酵母在混合培养条件下各菌株生长相互影响的因素,以纯培养为对照,研究两种酵母菌酿酒酵母(简称Sc)和东方伊萨酵母(简称Io)氨基酸代谢的差异,探讨差异氨基酸对Sc生长的影响.结果表明,Io与Sc混合培养体系与Io纯培养体系氨基酸代谢情况相似度较高,且多数氨基酸(包括天冬氨酸、脯氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸)含量较Sc纯培养时高,而Sc代谢精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、苏氨酸的速率较Io纯培养体系及混合体系时慢,且Io纯培养通过代谢生成的组氨酸、酪氨酸较Sc纯培养多,最高分别比Sc高出1.86,3.17倍.缺少精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸和苏氨酸及添加组氨酸会对Sc的生长产生显著抑制,表明混合体系中Sc生长受到抑制的原因一方面是因为Io代谢精氨酸、亮氨酸、半胱氨酸和苏氨酸的速率较Sc快,导致混合体系中Sc对这几种氨基酸的吸收不足,从而导致生长受到抑制,另一方面是Io生成的组氨酸对Sc生长产生抑制.

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