酵母工程菌S.pombe yAS56的构建及魔芋红茶菌发酵工艺的研究

为研究利用魔芋精粉制备魔芋红茶菌的可行性,从约氏梭菌(Clostridium josui)中克隆β-葡聚糖酶基因cel9C,构建粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)重组表达质粒pESP-2-2-cel9C,转化构建酵母工程菌,利用工程菌进行魔芋红茶菌发酵.采用析因实验设计和中心组合实验设计方法,以总酸为响应值,优化发酵条件,从7个因素中筛选出2个显著因素:装液量和时间.最佳条件为:绿茶0.4％、蔗糖7.5％、魔芋精粉0.25％、接种量10％、酿酒酵母／酵母工程菌接种细胞浓度比=0.5、装液量98.7 mL、时间124 h.在此条件下红茶菌总酸为(27.88±0.26) g/kg,与预测值相近,较优化前提高41.45％,表明利用魔芋精粉和酵母工程菌制备魔芋红茶菌具有可行性.
本发明提供一种桔梗健康白酒及其制备方法，通过将桔梗等中药材干炒后粉碎，然后以食用酒精为提取剂采用索氏提取器进行浸提，然后经过过滤，贮存等工序，之后将浸提后的中药材混入高粱中发酵一定时间后蒸馏，最后按比例将浸提液，发酵后蒸馏的酒和优质浓香型白酒混合后制得一种对身体有保健功效的健康白酒，既可以品尝到白酒的香味，又可以达到保健功效，能真正达到的对人的身体有好处，让人们喜欢喝并且愿意喝。
为了降低甘蔗酒中甲醇含量,本文采用紫外诱变和化学诱变选育得到低产甲醇的酿酒酵母,结合优化酿酒工艺:接种量2.0×107cfu/mL、23℃发酵6d,得到甘蔗酒的相对甲醇含量172.9 mg/L,比初始酵母酿造酒的284 mg/L,降低了39％.
目的研究酒精饲养小鼠精子死亡率和活动率与睾丸一氧化氮(NO)形成的关系.方法应用灌胃的方法饲养酒精组小鼠,并检测小鼠精子死亡率、活动率以及睾丸NO含量和NOS活性.结果酒精饲养小鼠精子死亡率明显高于对照组,而活动率以及NO含量和NOS活性均低于对照组.结论酒精诱导小鼠精子质量下降与NO浓度有关.
[目的]对热纤梭菌内切葡聚糖酶进行酿酒酵母细胞表面展示研究,探索降低纤维素酶成本和提高酶活的方法.[方法]通过提取产内切葡聚糖酶的热纤梭菌总DNA,根据热纤梭菌内切葡聚糖酶基因序列和酿酒酵母表面展示质粒载体pYDl上的多克隆位点设计引物,克隆内切葡聚糖酶目的基因,将其连接到酵母表面展示质粒载体pYDl上,构建重组质粒pYDl - GelA,并将其转化入酿酒酵母菌株EBY100中,经诱导表达后,测定表达产物的最适温度和pH,并分析影响其活性的金属离子种类和浓度.[结果]PCR扩增获得1400bp左右的内切葡聚糖酶CelA基因片段,并成功构建了该基因与酵母表面展示质粒载体pYDI的重组质粒pYDl - CelA.重组质粒转化酿酒酵母菌株EBY100后,在鉴定培养基上测定透明圈的大小得出最佳诱导时间为60 h.表达产物性质的研究结果显示其最造反应温度为50℃,在pH4.6时酶活性相对较高.[结论]该研究结果为后续对纤维素酶的进一步研究、改造、大量生产及应用奠定了一定的基础.
利用PCR方法扩增钙调蛋白依赖性激酶(CaM-dependent kinase 2)基因的蛋白质编码序列,经限制性内切酶Kpn I和BamH I酶切后连接入空载体pYES2/NTA构建真核表达载体,构建的pYES2/NTA-cmk2转化酿酒酵母菌株BY4741进行真核表达.经诱导和收集细胞后,对酵母细胞用玻璃珠震荡破壁,收集上清液进行镍离子亲和层析,并纯化CMK2,纯化的蛋白通过免疫杂交检测.并且初步研究了CMK2在酵母细胞氧化胁迫应答中的作用.