厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin真核表达载体构建及表达的初步分析

[目的]研究厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin真核表达载体构建及表达.[方法]通过对前期所获得的厚壳贻贝多条mytilin和myticin抗菌肽基因进行筛选,选择其中5条厚壳贻贝抗菌肽基因,采用PCR技术和DNA重组技术构建了相关的真核表达载体,并采用LiAC转化法将其转化到S78酿酒酵母中并进行初步表达分析.[结果]5种厚壳贻贝抗菌肽基因的真核表达载体构建成功,对转化酵母进行mRNA检测结果表明,5种厚壳贻贝抗菌肽的基因在S78酵母中成功转录.[结论]该研究结果为最终采取基因工程手段表达厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin并在此基础上开展厚壳贻贝抗菌肽的后续研究奠定基础.
RAVE（ regulator of the H＋-ATPase of the vacuolar and endosomal membranes）是调节液泡ATP酶（ V ATP酶）装配与拆卸过程的调节酶，由Rav1p、Rav2p和Skp1p 3个亚基构成。在酿酒酵母细胞中，当葡萄糖耗尽时，V ATP酶分解成V1、V0两部分，此时，RAVE与V1以复合物的形式存在于细胞质中。本研究利用同源重组技术，构建在基因RAV2的3′端定点插入FLAG标签的重组菌株BY4742 RAV2 FLAG，通过亲和层析原理纯化RAVE V1复合物，为后续利用电子显微镜对其进行三维结构研究奠定坚实的基础。结果表明：FLAG标签添加到Rav2p的C端可以成功纯化出RAVE V1复合物；结合质谱鉴定首次发现了Leu1p与RAVE存在相互作用关系，这使得对RAVE的研究转向一个全新的方向；此外，本研究方案对其他调节蛋白及与之相互作用的蛋白组的分离纯化具有借鉴意义。
以相同原料配比,用下面发酵法酿造6.0、6.5、7.0、7.5、8.0与10.0°P啤酒.样品总酸随原浓上升而提高,原浓低于7.5°P时,啤酒酸味明显.用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法在啤酒中检测出了10种有机酸:草酸、酒石酸、丙酮酸、苹果酸、α-酮戊二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸与琥珀酸,总量为738.17～799.50 mg/L,各样品间有机酸含量差异明显.琥珀酸含量最高;其次是柠檬酸、苹果酸、丙酮酸、乳酸与草酸.草酸、丙酮酸随着原浓的增加而升高.7.0、7.5、8.0、10.0°P啤酒中乳酸含量相近,6.0、6.5°P啤酒中乳酸含量急剧上升.研究结果表明,啤酒酵母产酸受原浓与发酵度的影响.
麦芽质量对啤酒质量的影响非常大.研究有质量缺陷的麦芽在啤酒酿造过程中对糖化麦汁的影响,结果表明:麦芽感官缺陷会引起糖化麦汁口感异常;麦芽水分低于4.5%会让麦汁香气不足,水分高于5.5%则会使麦芽的利用率降低;麦芽中的β-葡聚糖含量超过20 mg/100g,不但会使糖化麦汁的过滤速度延长5~10 min,同时还会降低啤酒的非生物稳定性;麦芽粗细粉差直接影响糖化麦汁的粘度、 α-氨基氮含量以及库值等的变化.
采用C3b受体花环实验探究了牙鲆红细胞对不同种类抗原的免疫黏附能力,确定了影响免疫黏附作用的理化因子.实验选取创伤弧菌、金黄色葡萄球菌和啤酒酵母3种不同类别的抗原分别与牙鲆红细胞在优化条件下反应.结果表明,牙鲆红细胞对3种抗原均有免疫黏附作用,在20℃、0.1mol/L PBS~(++)缓冲液的反应条件下,牙鲆红细胞黏附创伤弧菌、金黄色葡萄球菌和啤酒酵母的C3b受体花环率分别为(19.00±1.01)%、(6.09±1.36)%和(3.42±0.00)%,对3种抗原的免疫黏附活性差异显著(P<0.05).利用AKTA快速蛋白液相层析系统的Superdex 200 GL型高效柱分离纯化牙鲆红细胞膜蛋白Ⅰ型补体受体(CR1),通过dot-ELISA法检测发现红细胞膜蛋白组分中含有CR1成分,表明牙鲆红细胞膜上表达了与高等脊椎动物有较高同源性的CR1分子.此实验首次证明了牙鲆红细胞具有发挥免疫功能的重要物质基础.
本发明提供了一种固、液态酒基勾调优质白酒的技术,其特征在于将设计者研制成功的按酒基生产季节添加酸类脂类醇类等技术应用于以食用酒精或小烧原浆酒为酒基的勾调优质白酒工艺之中,不但使生产出的优质白酒色泽清亮透明窖香浓郁幽雅细腻绵甜甘冽,还可以根据需要任意勾调出酱香型、浓香型、米香型、其它香型等各种优质白酒。从而满足了人们改善饮酒结构美食健身弘扬我国酒文化的需要,如能得到广泛应用,必将产生明显的经济效益和社会效益。