希金斯炭疽菌中5个典型Septin的生物信息学分析

希金斯炭疽菌可以侵染菜心、萝卜等众多十字花科蔬菜引起炭疽病,给农业生产造成巨大的经济损失.septin是一个广泛存在于除植物以外其他生物的基因家族,其功能与细胞分裂、细胞内物质运输以及细胞周期的调控与细胞凋亡等关系密切,将成为新开发药物的潜在靶标.基于酿酒酵母中7个典型Septin蛋白的氨基酸序列,对炭疽菌属蛋白质数据库进行Blastp比对和关键词搜索,并通过SMART在线分析最终明确希金斯炭疽菌中含有5个典型的Septin.同时,从理化性质、跨膜区结构、二级结构以及亚细胞定位等方面对Septin进行生物信息学分析,结果显示,上述Septin均为亲水性蛋白,且不具有跨膜结构,其二级结构及亚细胞定位情况不同.
目的构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的酿酒酵母表达载体.方法利用通用载体质粒融合系统(UPS),首先将GFP片断连入donor载体,随后在Cre酶作用下与acceptor载体融合,获得了带有GFP片断的酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)表达载体.结果成功构建了以GFP为报告基因的酿酒酵母载体,并在酵母中得到表达.结论GFP是一种理想的报告基因.同时,利用UPS能够高效、简便地进行酵母表达载体的构建.
本文以青岛啤酒节作为研究对象,通过分析青岛啤酒这一品牌如何通过"造节"营销的方式来提升产品的市场占有率,在对成功的"造节"进行因素分析基础上,也对青岛啤酒节进一步的发展进行了展望.通过本文的"造节"成功因素分析也期望能够为新兴的"品牌造节"提供一定的经验借鉴,促进"品牌造节"能够良性发展.
酸度过高是野生葡萄酿酒过程中常见的问题之一.本试验研究了在不采取任何人工降酸措施的条件下,野生葡萄发酵及贮酒过程中的酸降变化规律.
[目的]敲除禾谷镰孢(Fusarium gramiearum)中碳源代谢调控因子FgCreA,并对其营养生长、有性生殖和致病力等方面进行研究,为研究禾谷镰孢中碳源代谢机制提供依据.[方法]根据酵母数据库SGD和NCBI数据库中的序列,利用酿酒酵母中碳源代谢调控因子Migl确定禾谷镰孢中的碳源调控因子FgCreA;在NCBI数据库中检索其他物种中碳源代谢调控蛋白,使用ClustalW2软件进行多重序列比对,并用MEGA5软件构建系统进化树,同时在InterProScan网站上预测其蛋白结构域;在NCBI数据库中检索与禾谷镰孢碳源吸收相关的结构基因和真菌毒素DON生物合成的相关基因,调取起始密码子上游1 000 bp的片段,预测FgCREA基因结合位点位置;用Primer5软件设计引物,利用Split-PCR和PEG介导原生质体转化的方法进行基因敲除,并通过PCR和Southernblot验证获得FgCREA基因敲除突变体Fgcrea.根据突变体Fgcrea营养生长、有性生殖和致病力等方面的变化分析FgCREA的功能.[结果]通过生物信息学方法,明确禾谷镰孢中只有一个碳源代谢调控因子基因FgCREA (FGSG_09715),氨基酸序列416 aa,共包含两个保守的C2H2锌指结构区域.FgCreA同源蛋白在各类真菌中均存在一定程度的同源性,具有较高的保守性.禾谷镰孢碳源吸收相关结构基因(XYL2、ARA1、ICL1、PG1、SUC2)和真菌毒素DON生物合成相关基因(TRI1、TRI3、TRI4、TRI5、RI6、TRI7、TRI8、TRI10、TRI12、TRI101)启动子区均含有FgCREA DNA结合位点.采用Split-PCR技术和PEG介导的原生质体转化,通过PCR和Southern blot获得并验证了两个FgCREA基因敲除突变体.表型观察发现,突变体Fgcrea的生长速度与野生型相比下降90％;分生孢子形态正常,但产孢量与野生型相比降低88％;有性生殖阶段,突变体Fgcrea可以产生正常的子囊壳、子囊和子囊孢子,但需要比野生型长20-28 d;突变体Fgcrea对钠盐较敏感,侵染小麦穗不发病.[结论]获得禾谷镰孢碳代谢调控因子FgCreA敲除突变体,明确FgCreA参与营养生长和有性生殖,并能够影响致病过程.但是否影响相关结构基因的转录水平和DON生物合成仍需进一步验证.
本试验利用法国著名葡萄分类学家皮埃尔·嘎勒的葡萄叶片表现型分类方法,对烟台葡萄产区主载酿酒品种的叶形结构参数进行测量分析和叶片的标准化描述.结果表明,12个品种的9个叶形参数方差分析结果均达到差异显著水平,可作为鉴别葡萄品种的叶片参数指标,但以SS、SI、δ、ε和S等5个参数鉴别效果最为明显.利用该方法建立葡萄品种资源数据库,既有利于品种资源信息收集,实现品种标准化描述,也有利于对生产中容易混淆的品种进行直观准确鉴别.