红树林内生真菌的分离及代谢产物生物活性的初步研究

从8种红树林植物中共分离出85株内生真菌,经鉴定发现其主要类群为无孢类群(Mycelia sterilia),短梗霉属Aureobasidium spp.和盘长孢属Gloeosporium spp.,分别占菌株总数的50.6%、18.0%、14.6%.对这85株内生真菌的代谢产物生物活性研究发现:其菌丝和发酵液提取物对试验细菌表现出较好的抗性:对大肠杆菌有抗性的菌株比例分别为22.4%、21.2%、金黄色葡萄球菌为12.9%、14.1%,枯草芽胞杆菌为20.0%、36.5%;其发酵液提取物对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、白色念珠菌Candida albicans、新月弯孢霉Curvularia lunata等试验真菌均有较好的抗性,抗性菌株占菌株总数的比例分别为25.9%,23.5%,28.2%,而菌丝提取物均未表现出抗性;有8株(占菌株总数的9.0%)可产生抑制小麦发芽和芽生长的代谢物,具有除草剂活性;通过本实验建立的全细胞定向筛选模型发现:有14个菌株的代谢产物对耐药性大肠杆菌具有拮抗活性,占菌株总数的16.5%.以上结果表明:红树林内生真菌蕴含丰富的生物活性物质,在新型药物先导物和除草剂的开发方面都表现出潜在的应用前景.
构建高产β-葡萄糖苷酶的工程菌株并将其应用到2,6-二甲氧基对苯醌的发酵制备中.通过聚合酶链式反应从酿酒酵母CS1401的总DNA中扩增得到β-葡萄糖苷酶基因,并与载体pPICZαA连接后导入毕赤酵母X33中进行甲醇诱导表达;对表达成功的重组菌株进行β-葡萄糖苷酶活力测定;同时将酿酒酵母CS1401和重组菌株接种到小麦胚芽培养基中进行发酵并测定2,6-二甲氧基对苯醌的发酵产量.结果表明,酿酒酵母CS1401的β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母X33工程菌株中得到高效表达,酶活力达到4.5 U/mL,为酿酒酵母CS1401的5倍;2,6-二甲氧基对苯醌的摇瓶发酵产量达到935.7 μg/g,比酿酒酵母CS1401提高了0.4倍.因此,高产β-葡萄糖苷酶的重组工程菌株在2,6-二甲氧基对苯醌的发酵制备中具有一定的应用前景.
利用酿酒酵母生产人源化糖蛋白,需对其糖基化途径进行基因工程改造.酿酒酵母糖基化相关基因ALG3、OCH1、MNN1的敲除导致胞内糖蛋白低的N-聚糖位点占有率和菌株缓慢的生长速度.为了提高糖基化缺陷型菌株的N-聚糖位点占有率,酿酒酵母的ALG6基因被过量表达.结果表明,ALG6的过量表达不仅能够提高菌株N-聚糖位点占有率,还能回补其生长速度,提高外源蛋白人类溶菌酶的分泌效果.
乙酸苯乙酯是苹果酒里的重要香气物质之一,是在醇乙酰基转移酶(AATase)的催化下由乙酰辅酶A和苯乙醇缩合而成.从法尔皮有孢汉生酵母(Hanseniaspora valbyensis)中收集细胞膜片段,然后经过DEAE Sepharose、Sephadex G-75、Octyl Sepharose三步层析分离得到纯酶.纯化后的酶经SDS-PAGE电泳,得到一条明显的条带,分子量在37kD左右.此酶的最适反应条件是在30℃、pH7.0,在10℃以下酶比较稳定,pH稳定在7.0～8.0.重金属离子Hg2+、Zn2+、Pb2+对酶活有明显的抑制,EDTA、Mn2+对酶活没有太大的影响,Mg2+能激活此酶.此酶也能催化其它重要乙酸酯的合成,但对乙酸苯乙酯的合成具有特异性.
[目的]研究重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的性质.[方法]由重组大肠杆菌制备重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶发酵液,经乙醇分级沉淀和DEAE-650M离子交换层析分离纯化后进行SDS-PAGE纯度鉴定,最后分析纯化后重组酶的酶学性质.[结果]SDS-PAGE分析表明纯化后得到了较纯的重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶,比活力达13 437 U/mg,纯化倍数为19.85倍,回收率这20.60%,分子量约30 kDa.纯化后重组酶的最适pH值为6.0,pH值4.5～6.0较稳定;最适温度为50℃,40～50℃较稳定;Cu2+和Fe2+对其活力有显著的抑制作用,Mg2+、Zn2+和Mn2+对其活力有抑制作用,比较适合在啤酒酿造上使用.[结论]该研究为重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的工业化应用奠定了基础.
海红果盛产于晋陕蒙三省交界处.海红果汁选用黄土高原优质海红果为原料,海红果营养丰富,含钙居水果之王.称之为钙王的美名,是老少皆宜的营养补品,全国稀有的含多种微量元素果类品种,海红果色泽鲜红,固有红宝珠美誉之称,海红果香味沁人,营养价值极高,海红果除提取果汁外,可酿制成海红果酒,还可以用天然人工提取出果汁勾兑果酒.味美酸甜适囗,飘香浓郁.据国家食品质量安全检验检测中心检测鉴定,它含有果糖、葡萄糖、有机酸外,还含有人体必需的钙、铁、钾、锌、硒、总黄酮等多种微量元素.特别是含锌、总黄酮的营养成份,已成为本世纪营养学中重点开发的高新科技项目.应用范围:是老中青少年的康健所需的营养佳品.