棉籽粕源发酵蛋白质饲料的代谢产物研究

本试验旨在通过液相色谱串联质谱(LC-MS)代谢组学分析平台对不同微生物棉籽粕源发酵蛋白质饲料代谢产物进行研究.采用LC-MS法对对照组、假丝酵母组、酿酒酵母组、复合组的发酵代谢产物进行分析,结合偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)方法对数据进行模式识别和小分子差异代谢产物寻找.结果表明:各试验组代谢产物相对含量与对照组相比差异显著(P＜0.05),且在PLS-DA分析中得到了很好的分离,主要表现在甘露醇、琥珀酸等糖类代谢产物；磷酸胆碱、L-肉碱、甘油磷酸、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰胆碱(PC)等脂类代谢产物；二肽、三肽、甜菜醛、同型半胱氨酸等蛋白质与氨基酸的代谢产物；以及烟酸、阿魏酸、尿嘧啶、乙醇醛等其他途径代谢产物.除与脂类代谢有关的甘油磷酸、PE、PC相对含量显著降低之外(P＜0.05),其他试验组小分子代谢产物相对含量均比对照组显著增加(P＜0.05).由此可见,不同菌种发酵饲料中含有大量糖类、脂类、蛋白质等代谢途径产生的小分子代谢产物,含量因发酵菌种的不同而不同.
试验以一种酿酒葡萄为原料,利用顶空固相微萃取/气相色谱-质谱联用技术(HS-SPME/GC-MS)检测了不同可同化氮含量(200、300、400 mg/L)、酵母多糖(150、250、350 mg/L)、发酵温度(14、18、22℃)、初始pH值(3.3、3.5、3.7)和SO2添加量(40、70、100 mg/L)处理发酵酒样中的挥发性香气化合物,探讨了复合酿造因子对贵人香干白葡萄酒主要香气物质含量的影响关系.结果表明,300 mg/L的可同化氮有利于高级醇、酯类、单萜化合物的积累;酵母多糖添加量为250 mg/L时,单萜化合物质量分数达到最大值(198.54 μg/L);发酵温度从14℃升高到22℃时,高级醇含量显著升高,酯类和单萜含量显著降低;提高葡萄汁初始pH有利于单萜化合物的积累,不利于高级醇、酯类的生成;添加70 mg/L的SO2时,单萜化合物质量分数最高(181.73 μg/L).正交试验极差分析表明,发酵温度和SO2添加量对高级醇含量影响较大;发酵温度与可同化氮对酯类香气物质含量的影响较大,酵母多糖和pH值对单萜类香气物质含量影响较大.各处理组间的聚类分析可知,可同化氮和酵母多糖对主要香气化合物的影响关联度较高、葡萄汁初始 pH 值和 SO2添加量关联度较高.较低的发酵温度有利于酒样中香叶醇、异戊醇、苯乙醇、辛酸乙酯的生成,添加中等浓度的可同化氮和酵母多糖可促进乙酸异戊酯、乙酸己酯和己酸乙酯的合成,较高的初始pH值有利于芳樟醇、香茅醇和香叶醇的积累.综合分析,发酵温度18 ℃、初始pH 值3.5、70 mg/L SO2、300 mg/L可同化氮、250 mg/L酵母多糖酿造贵人香干白葡萄酒,可有效促进酒样中主要香气化合物的合成释放.
山农4号是山东农业大学采用综合育种技术育成的一个集优质、高产、早熟和抗逆性强等优良性状于一体的二棱冬性啤酒大麦新品种.根据山农4号的选育经验,探讨了新品种选育的技术路线,如依据山东及黄淮麦区的生态特点和生产需求,制定科学合理的育种目标;应用综合育种技术,将优质、高产、早熟及抗逆性强等性状综合为一体,实现品种选育性状的突破.探讨了新品种开发利用的方法,如跨地区、跨行业协作攻关,"育、试、繁、推"一体化;"科、工、农"横向联合,"产、供、销"一条龙.此外,还探讨了新品种开发利用的具体措施等.
‘华葡1号’是中国农业科学院果树研究所葡萄课题组培育而成的抗寒抗病酿酒与砧木兼用葡萄新品种。本文从高标准建园、整形与简化修剪、花果管理、根域管理和病虫害综合防控等关键环节对‘华葡1号’的标准化生产技术规程进行了详细阐述，为‘华葡1号’的标准化种植提供技术支撑。
以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到蔗糖酶基因(suc 2),并将其克隆到表达载体pSE380中,将得到的重组质粒pSE-suc 2转化进E.coli BL21中,利用镍金属螯合层析方法分析测定其酶学性质.重组菌株的SDS-PAGE结果显示重组蔗糖酶基因(suc 2)有60kDa目的蛋白出现,纯化的SDS-PAGE分析得到均一的蛋白条带;重组蔗糖酶的Km值为47.73mmol/L,最大反应速率为79.59mg还原糖mg-1蛋白min-1,最适温度为42℃,最适pH值为5.5,Zn2+、Cu2+对重组蔗糖酶酶活有较强的抑制作用,Ba2+、Mg2+、Mn2+对重组蔗糖酶酶活稍有激活作用.
本研究将酿酒酵母穿梭质粒pESC-Leu的诱导型启动子GAL1和GAL10分别替换为PGK1和TEF1启动子,构建了组成型双启动子表达载体pESCD,再将甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的编码基因亚克隆到pESCD的Sal Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点之间,构建了组成型表达UGT76G1的重组质粒pESCD-UGT.将pESCD-UGT转化到酿酒酵母YPH499中进行表达,结果确定该重组酵母在SD-L液体培养基培养24h达到稳定期,菌体培养8h蛋白表达量高,选用1％的甲苯作为重组菌全细胞催化的通透剂时,催化15h产生288mg/L的莱鲍迪甙A,其产量是对照组的5倍.