巨核酸酶I-SceI转基因元件的构建及其在斑马鱼中转基因效率的评估

巨核酸酶I-SceI是由酿酒酵母线粒体中核糖体大亚基上的Ⅰ型内含子编码的一种核酸内切酶,近年已被应用于转基因研究中.I-SceI介导的转基因大多是将I-SceI蛋白和带有其识别位点的质粒共注射于动物的受精卵,但注射酶蛋白前期处理耗时长且工作量大,直接用I-SceI的mRNA代替蛋白进行注射更为简捷.本研究应用I-SceI mRNA介导荧光蛋白基因在斑马鱼中的转植,进一步了解其转基因效率.首先设计合成带有巨核酸酶I-SceI编码序列的辅助质粒(pCS2-I-SceI),并分别构建了带有巨核酸酶I-SceI识别位点、EF1α启动子和荧光蛋白基因(eGFP/RFP)编码序列的供体质粒pI-SceI-EF1α-eGFP/RFP.辅助质粒pCS2-I-SceI体外转录成mRNA,以50 ng/μL供体质粒和100 ng/μL的I-SceI巨核酸酶mRNA共注射到斑马鱼(Danio rerio)受精卵中,注射后48 h的斑马鱼eGFP的平均荧光表达率可达75.86％.在斑马鱼的头部、躯干到尾部均可观察到荧光蛋白的表达,且随着胚胎发育,荧光信号逐渐增强.结果表明I-SceI系统在斑马鱼中可介导较高效率的转植,具有在经济鱼类转基因研究中应用的潜力.
双乙酰是啤酒发酵过程中产生的一种重要的发酵副产物,也是衡量啤酒是否成熟的尺度.利用激光诱变选育双乙酰值低的啤酒酵母,得到一株优良菌株.用该菌株酿造的啤酒,其双乙酰值为0.1253mg/L.
建立了超声破碎酿酒酵母细胞和冷三氯乙酸化学浸提海藻糖的工艺,探索了离子色谱分析技术条件,采用响应曲面法(RSM),研究了液料比R、超声功率W、工作时间T1、超声总时间T2和浸提时间T3等5个试验关键因子对海藻糖提取的影响规律,并构建了动态控制的数学模型,得到了海藻糖提取最优工艺参数依次为:R为7、W为698W、T1为4.9 s、T2为7.3 min、T3为9 min.结果表明:模型极显著,具有可行性和有效性,超声功率、工作时间和超声总时间对海藻糖提取量的影响最大,为生产中的应用提供了科学依据.
应用超高效液相色谱-串联质谱（ UPLC-MS／MS）技术定量检测了啤酒和麦汁中的2，5-二甲基-4-羟基-3（2H）-呋喃酮（DMHF）、2（或5）-乙基-5（或2）-甲基-4-羟基-3（2H）-呋喃酮（EMHF）和2-乙酰吡咯（2-AP）3种麦香风味物质。使用 C18固相萃取柱净化样品。采用 ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.8μm）分离，以0.1％（ v／v）甲酸水溶液和0.01％（ v／v）甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱。结合这3种化合物的保留时间，在正离子模式下，采用多反应监测（ MRM）技术进行定量检测。当质量浓度低于1000μg／L 时，校准曲线的线性良好（R2＞0.999）。方法的加标回收率在74.3％～86.7％之间，相对标准偏差（RSD，n＝6）在4.8％～7.3％之间。由于酵母发酵时会生成 DMHF和 EMHF，导致啤酒中这两种物质的含量明显高于麦汁。某些品类啤酒如印度淡色爱尔啤酒（ IPA），通常含有较高的麦香风味物质。该法样品处理简单，选择性好，且灵敏、准确、重现性好，可用于啤酒生产的过程控制。
采用自行设计的复合式厌氧反应器在常温下对啤酒废水进行了厌氧发酵产沼气的实验研究,将进水COD控制在5 000 mg/L左右,采取逐步缩短HRT的方法来提高进水有机负荷,结果表明,启动运行41 d之后,产气量上升速度加快,反应器成功启动运行;在稳定运行过程中,随着负荷的升高,产气量呈阶梯式渐次上升,COD去除率保持在90％以上,出水pH值维持在7.0左右,TSS去除率达到60％以上,出水水质较好,说明该反应器具有较好的厌氧消化处理有机废水的能力.
本发明涉及白酒催陈领域，更具体的说是功率超声波白酒催陈用机械搅拌装置，包括底座体、全方位搅拌器、转动筒体、固定筒体和超声波振动器，所述的底座体包括底板、转动槽、圆通孔、支撑台、管道支撑架、转轴、转动锥齿轮和传递齿轮，圆通孔贯穿设置在底板的中端，圆通孔设置在转动槽内，转动槽设置在底板上，支撑台固定连接在底板上，管道支撑架固定连接在支撑台上转轴的下端转动连接在底板内；本发明的有益效果为底座体、全方位搅拌器、转动筒体、固定筒体和超声波振动器可以使对白酒的发生不规则的搅拌，促进白酒在超声波影响下发生更为激励的碰撞，使白酒内的分子接触更为频繁，增加白酒的催陈效率。