用草本植物番茄鉴定五种柑橘类病毒

[目的]通过嫁接木本指示植物进行柑橘类病毒鉴定需要合适的季节和较长的显症时间,并且柑橘木本指示植物的遗传转化和基因功能验证体系尚不成熟,研究其与寄主间的互作较为困难.因此,寻找合适的草本鉴定和实验寄主对于更好地进行柑橘类病毒的鉴定及研究其与寄主间的互作具有重要意义.论文旨在明确中国报道的5种主要柑橘类病毒,包括柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis virold,CEVd)、柑橘曲叶类病毒(Citrus bent leaf viroid,CBLVd)、啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)、柑橘矮化类病毒(Citrus dwarfing viroid,CDVd)和柑橘树皮裂纹类病毒(Citrus bark cracking viroi,CBCVd)对番茄(Solanum lycopersicum)的侵染能力,进而明确其可否作为5种类病毒的鉴别寄主或实验寄主.[方法]将5种柑橘类病毒的野生型分子变种(分别为CEVd.188,长370nt;CBLVd.032,长328 nt;HSVd.citl06,长296 nt;CVd-Ⅲ.072,长295 nt;CVd Ⅳ Ca,长285 nt)二聚体cDNA克隆质粒(克隆于pGEM-T载体),采用限制性内切酶NdeⅠ在37℃条件下进行酶切线性化处理,经琼脂糖凝胶电泳分析鉴定酶切成功后,将该含有目标片段的线性化重组质粒采用T7 RNA多聚酶在37℃条件下进行体外转录,获得类病毒RNA二聚体溶解于1％K2HPO4接种缓冲液中,机械摩擦接种Alisa Craig和Rutgers番茄(S.lycopersicum var.Alisa Craig和var.Rutgers)叶片,置于24℃温室条件下培养.接种60d后,采集新生叶片采用CTAB法提取番茄叶片总RNA,通过RT-PCR对接种的类病毒进行检测.将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析后,切胶回收目标片段,与pMD18-T载体连接,热击转化大肠杆菌DH5α感受态细胞.经PCR鉴定后挑取阳性克隆进行序列测定,采用DNAMAN version 6.0软件对获得的cDNA序列进行相似性分析.[结果]线性化质粒体外转录后经琼脂糖凝胶电泳分析显示,每个质粒转录产物均可检测到目标大小的RNA条带.接种后,RT-PCR检测显示5种类病毒侵染率表现出显著差异,CEVd、CDVd和HSVd可以侵染大部分接种植株(侵染率分别为7/8、5/8和7/8).从接种成功的植株样品中对所接种类病毒后代的cDNA克隆和序列测定显示,随机测定的5-10个克隆中均能找到与接种类病毒cDNA-致的核苷酸序列,后代序列与接种序列间的相似性在99.7％以上;后代分子变异分析显示变异位点小于1 0个,变异率小于0.3％;而CBLVd和CBCVd不能侵染或侵染率很低(0或1/8).[结论]CEVd、CDVd和HSVd能够侵染Rutgers和Alisa Craig番茄,2种番茄均可以作为3种类病毒的草本鉴定和实验寄主;而CBLVd和CBCVd难于侵染Rutgers和Alisa Craig番茄.在接种的Alisa Craig番茄品种上,各类病毒接种植株均比接种缓冲液对照表现显著的矮化效果;在Rutgers植株上,仅有接种了CEVd的植株表现较对照的矮化效果.
简要介绍了目前国内主要生产的三类红曲包括酿酒红曲、色素红曲和功能红曲.并对这三类红曲的色价、色调、外观、代谢组分、用途进行了比较.本文用不同种类的红曲米进行抑菌实验,结果显示不论是功能红曲、酿酒红曲,还是色素红曲都对一些菌有明显抑制作用.主要对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、毛霉有抑制作用,对酵母菌和大肠杆菌抑制作用不明显.
通过品比试验,进一步研究了啤酒大麦法瓦维特的特征特性和生长发育特点,为该品种在新疆大面积的推广和栽培技术措施配套,提供了参考依据.
考察了半胱氨酸(CYS)添加量和添加时间对酿酒酵母(Saccharomy cerevisiae Y08)合成谷胱甘肽(GSH)的影响.结果表明:在发酵开始时添加半胱氨酸,能够增强菌体合成GSH能力,当添加量达到0.05％时,GSH产量达到最大值(52.28mg·L-1).在发酵稳定期(10h)添加半胱氨酸,胞内GSH含量增加不显著,GSH产量仅提高了10.57％.为降低半胱氨酸对菌体生长的抑制,对酿酒酵母原生质体进行复合诱变,筛选半胱氨酸抗性突变菌株.结果表明:半胱氨酸对半胱氨酸抗性突变菌株的生长抑制作用减轻,抗性菌株能够在含有0.4％半胱氨酸的发酵液中正常生长,GSH产量和胞内GSH含量比未加半胱氨酸时均有显著提高,分别提高了29.28％和29.64％,且性状稳定.
在生产啤酒的过程中,应用乳酸调节糖化过程中的pH,可以提高啤酒的质量,保证啤酒的品质,促进双乙酰氧化下降;同时,在啤酒的运输、储藏过程中,使用乳酸可以控制啤酒中老化味的生成,延长啤酒的货架期,从而保证啤酒的品质.
啤酒糟经预处理后可以改变其紧密度以及粒径大小,从而影响酶解效率,随着粉碎程度的增加,酶解效率增加,其中,啤酒糟原样经木聚糖酶和纤维素酶水解后,阿魏酰低聚糖(FOs)的得率分别为31.89％和33.41％,木聚糖酶和纤维素酶协同作用后,FOs的得率为47.01％;刀片粉碎后球磨30 min的啤酒糟,经木聚糖酶和纤维素酶水解后,FOs的得率分别为39.49％和50.36％,而经木聚糖酶和纤维素酶协同作用后,FOs的得率增加到了64.00％.实验结果表明,预处理可以提高酶解效率,纤维素酶和β-葡聚糖酶的存在有利于木聚糖酶的作用,从而在一定程度上提高从啤酒糟中提取FOs的效率,初步实现啤酒糟的高值化利用.