甜蛋白monellin基因在酿酒酵母中的分泌表达

人工合成的单链甜蛋白monellin基因与经改造后的基因分别克隆到带有酵母半乳糖可诱导启动子GAL1的穿梭表达质粒pYES2.0中,得到表达载体pYESM及pYESMT.在表达载体pYESMT中,monellin基因的上游连接酿酒酵母的α-信号肽序列,得到分泌表达载体pYESMTA.分别将3个重组质粒转化酿酒酵母菌株INVsc1中进行表达.具有突变monellin基因的菌株INVMT/pYESMT的monellin蛋白表达量明显高于含monellin基因的菌株.而含有pYESMTA的菌株可将monellin基因分泌到胞外,表明α-信号肽序列能很好地将酿酒酵母中的重组monellin蛋白引导到胞外,完成分泌表达,且表达产物具有生物活性.
目的:探究溪黄草不同基原植物的抗菌和抗真菌活性,为建立中药溪黄草的质量标准提供参考.方法:分别以80％的乙醇水溶液和水为溶剂对6种溪黄草基原植物进行超声波提取,以金黄葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌为供试细菌,以白色念珠菌、酿酒酵母和产黄青霉为供试真菌,采用琼脂平板扩散法测定各溪黄草基原植物醇提物和水提物的抗菌和抗真菌活性,用液体二倍稀释法测定其最小抑制浓度(MIC).结果:6种基原植物的醇提物对供试的革兰阳性菌均有较强的抑菌活性,而对阴性菌抑制较弱或无抑制;其中,溪黄草和显脉香茶菜对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,MIC分别为0.063、0.125 g· mL-1.6种基原植物的醇提物中,溪黄草的抗真菌活性最强,其对白色念珠菌和酿酒酵母的MIC均为0.125 g·mL-1.6种基原植物的水提物对供试细菌和真菌几乎没有抑制活性.结论:6种溪黄草基原植物中,溪黄草醇提物的抗菌和抗真菌活性最强.
本发明涉及一种无窖泥浓香型白酒的制备方法，属于制酒方法领域，本工艺节省了传统浓香型白酒发酵窖池建造泥窖的经济成本以及使用和养护泥窖的经济成本，同时还节省了大量的劳动力，如：人工窖泥的培养成本、老熟成本、养护成本、每隔3?5年老化的人工窖泥的更换成本。本过程相较于现有技术缩短了发酵期，因为本工艺直接使用己酸与乙醇配制成己酸乙醇溶液，节省了窖泥中的己酸菌发酵生成己酸的时间，与扳倒井现有的传统浓香型白酒生产工艺比较，缩短了20—30天的发酵期，节省了时间成本、粮食和原酒之间的转化成本。
本发明属于酿酒技术领域，涉及浓香型白酒快速发酵方法。本发明要解决的技术问题是现有的浓香型白酒发酵方法发酵缓慢，发酵周期长。本发明解决技术问题的技术方案是提供一种浓香型白酒快速发酵方法，包括：待发酵糟醅填入窖池发酵、向发酵好的糟醅中添加粮食和糠壳、蒸馏摘酒、糊化、糊化后糟醅冷却后加曲药又得待发酵糟醅；填入窖池发酵前向待发酵糟醅中添加发酵糟，添加的发酵糟的质量占添加前待发酵糟醅质量的20~50%。本发明方法为浓香型白酒提供了新的快速发酵方法，提高了发酵速度，缩短了发酵周期。
建立了高效液相色谱法对苦瓜啤酒中功效成分--苦瓜皂苷检测的方法.以70%乙醇超声辅助提取苦瓜皂苷,大孔树脂纯化,得苦瓜皂苷纯品.以自制的苦瓜皂苷为标准品与苦瓜啤酒中的苦瓜皂苷进行比较,用ODS-3柱,在205nm下,乙腈和水(55∶45,V/V)为流动相,流速1.0ml/min,经反相液相色谱分析,以保留时间定性、峰面积定量.结果得出苦瓜啤酒中苦瓜皂苷的总含量为22.16μg/ml,相对标准偏差＜4%,回收率在97.53%～100.32%之间.此方法重现性好且操作简单,是比较理想的检测方法.
用刚果红法测定β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶活力,研究重组酿酒酵母(S.cerevisiae)菌株SC-βG分泌表达的重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的部分酶学性质,并与出发菌株枯草芽孢杆菌(B.subtilis)表达的原始酶的性质进行比较.结果表明,重组酶保持了与原始酶相同的底物专一性.重组酶的最适反应温度为35℃,而原始酶为55℃.重组酶的热稳定性也发生了改变,40℃热处理20min只保留63.4%的最初酶活力,但温度再升高时对热处理敏感度降低,70℃的热处理20min仍保留45.9%的最初酶活力;而原始酶50℃时稳定,60℃以上的热处理酶活力损失很大.与原始酶相比,重组酶的最适pH值下降为pH5.0,而原始酶为pH6.5;相比原始酶在pH7.0有最大稳定性,重组酶在pH5.5时有最大稳定性.重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最适反应条件与原始酶相比更接近啤酒的实际生产条件.