酿酒酵母表面展示β-淀粉酶及其酶学性质研究

通过PCR技术扩增来源于大麦的β-淀粉酶基因，将其与酿酒酵母细胞壁蛋白d凝集素基因在读框内融合，构建得到表面展示载体pBA-AG，进一步将该重组质粒通过遗传转化，整合到酿酒酵母W303-1A的染色体中，获得了β-淀粉酶经过仅凝集素锚定信号结合到细胞壁上的重组酵母。重组酵母表面展示的β-淀粉酶活力为131U／g干细胞。对展示的β-淀粉酶酶学性质研究表明，其最适反应温度为50℃，最适作用pH为5．0，与游离酶相比，其温度稳定性和pH稳定性均得到提高。本研究利用α凝集素系统首次将β-淀粉酶成功展示在酿酒酵母表面，为以酿酒酵母为基础的全细胞催化剂研究与应用打下了一定基础．
从啤酒酵母中提取出碱溶性粗多糖ASP,经乙醇分级、savag法脱蛋白以及分子筛层析进一步纯化得ASP2和ASP3,采用半微量凯氏定氮法,通过消化、蒸馏、滴定后计算其蛋白质质量分数,ASP,ASP2,ASP3分别为15.41%,3.17%和2.89%.
选取广西、湖南等地野生葡萄，与经典酿酒葡萄比较，研究抗氧化活性和活性物质，同时监测葡萄酒发酵过程中各指标的动态变化，并对不同品种葡萄酒的抗菌性进行研究.结果表明：赤霞珠的酚类含量和抗氧化活性高于野生葡萄和玫瑰香葡萄，但野生葡萄酒的抗菌性能显著优于赤霞珠和玫瑰香葡萄酒.葡萄酒在发酵过程中其抗氧化活性和酚类物质含量均随发酵过程的进行而升高；总抗氧化活性与总酚含量、氧自由基清除能力与原花青素含量成显著正相关，相关系数均大于0．989；总花色苷含量在发酵初期上升，后期下降，葡萄酒颜色变浅.
生态工程系统(EES)处理无毒啤酒工业废水是实现低成本废水资源化的有效手段.实验结果表明:在水力停留时间(HRT)为12 h时,上流式污泥反应器(UASB)对COD的去除率约为67%～79%,均值为76.3%;渗滤式湿地生物生态系统(IWBE)对TP的去除效果非常理想,平均去除率为98.5%;整个EES对实验废水COD去除率的均值是96.3%,对TP去除率平均为98.9%.依据实验结果,可知本系统是实现物质全息化价值链循环和污水处理产业生态化的可行途径.
以增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)为报告基因评价不同启动子在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)中的转录功能,寻找高效表达外源蛋白的启动子.以改造后载体pKLAC1*为基础,PCR克隆来源于K.lactis、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和Spathaspora passalidarum中7个不同的启动子,采用重叠延伸PCR分别与egfp融合后插入pKLAC1*,Bst XI线性化重组表达载体后电转化K.lactis GG799获得重组菌,利用特异性引物PCR扩增法快速筛选获得不同启动子调控下的单拷贝整合重组菌,通过定性和定量分析绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,比较不同启动子的转录活性.荧光显微镜观察结果表明,K.lactis来源的pKladh4、pKlmal22,S.cerevisiae来源的pScgal7、pScgpd1,S.passalidarum来源的pSpmal1、pSpmal6、pSpgal1均成功调控EGFP的表达.荧光分光光度计定量测定结果表明,重组菌在pKladh4、pScgal7、pScgpd1调控下荧光强度分别为2.82、2.92和4.74,且在相应的诱导条件下转录能力分别提高了13%、57%和22%,均高于当前应用最广泛的强启动子pKllac4(荧光强度为2.13).探究了不同来源启动子在K.lactis中的功能,pKladh4、pScgal7、pScgpd1具有高效起始转录能力,其中pScgpd1在K.lactis中的应用为首次报道.
[目的]比较分析了常规水提法和超声法2种方法获得的马齿苋水提物对自由基清除和抗菌活性影响.[方法]分别通过常规水提法和超声法获得了马齿苋水提物,然后将不同浓度的马齿苋水提物加入到反应液中,分别测试了它们的清除氧自由基、OH-自由基、DPPH自由基的活性,并分析比较了它们的抗菌活性.[结果]马齿苋水提物能够显著地清除上述3种自由基,同时对测试的5种菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和黑曲霉)的生长均有一定的抑制作用;其中,超声法获得的马齿苋水提物在各测试浓度点的抗氧化抗菌活性均较常规水提法获得的马齿苋水提物强.[结论]超声法获得的马齿苋水提物具有较强的抗氧化抗菌活性.