酿酒葡萄品种SSR-PCR体系的优化与建立

以酿酒葡萄品种为原料,研究了聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系的主要成分对葡萄简单序列重复(simple sequence repeats,SSR)扩增结果的影响,并确定了各成分的最佳用量.以改良的十六烷基三甲基溴化铵法(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)从葡萄中提取基因组DNA,通过单因素试验分析SSR-PCR体系中主要成分Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度和模板DNA浓度对葡萄SSR-PCR反应体系扩增效果的影响.同时,采用正交优化设计试验确立酿酒葡萄SSR-PCR最佳25μL反应体系为Mg2+浓度为2.5 mmol/L,dNTPs为0.15 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.5U,引物为0.5μmol/L,DNA含量为40 ng/25 μL.通过优化试验的直观分析和方差分析得出PCR体系的主要成分对扩增结果的影响程度依次为:Mg2+＞ Taq DNA聚合酶＞dNTPs＞引物＞模板DNA.利用此体系对4个酿酒葡萄品种DNA进行SSR-PCR反应体系扩增并进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果扩增条带清晰稳定,说明该体系可用于酿酒葡萄品种SSR标记的研究.
垦啤麦7号已在黑龙江省种植8年多,是东北地区种植大麦以来种植面积最大的2棱啤酒大麦品种。其是目前中国啤酒大麦品质较好的品种之一。然而,由于内蒙古东北部常年在5月份干旱,一旦播种过早,则出苗不齐,农民都习惯在5月下旬以后播种,而垦啤麦7号一旦在5月20日以后播种,由于其对光温反映敏感,不但抽穗不齐、有效分蘖低,而且根腐病重、产量低、品质差。
采用甘蔗茎作为酒母载体,以甘蔗原汁为原料,经加热灭菌后进行发酵,并以甘蔗渣作为燃料,发酵醪采用双蒸的方法蒸馏出蔗香型白酒.实验结果表明:以产酯(香)高的酿酒酵母菌种先发酵3 d后加产酒高的酿酒酵母菌种发酵2 d为最佳发酵参数,产酒产酯达到最优.酿造的白酒保留了甘蔗特有的呈香物质,具有浓郁的蔗香味.
采用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白检测和聚合酶链反应扩增(polymerase chain reaction,PCR)检测DNA的浓度和纯度,对改良十六烷基三甲基澳化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法与2种商业试剂盒提取4种不同品种酿酒葡萄DNA的方法进行了对比分析,结果表明改良的CTAB法提取DNA完整性较好,基因组DNA样品的OD260/OD28o值均在1.8左右,4个酿酒葡萄均能扩增出PCR条带,且条带清晰,无拖尾现象.说明改良的CTAB法提取的酿酒葡萄基因组DNA浓度和纯度均较高,可以进行PCR扩增、电泳检测、遗传多样性分析以及基因图谱构建等下游分子生物学研究试验.
在序批式活性污泥(SBR)反应器中填充弹性立体填料,形成序批式生物膜反应器(SBBR),对SBBR和SBR处理啤酒废水进行对比研究.结果表明:SBBR对啤酒废水的去除效果均高于相同试验条件下SBR,且产生的污泥量少,运行稳定.
利用实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测0.1%甲醛交联RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)富集SF2蛋白相互作用的RNA效率,为研究可变剪接因子SF2相互作用RNA的富集效率提供准确的质检方案.采用RIP技术获取HeLa细胞中SF2蛋白相互作用的RNA,等比例加入外源酿酒酵母(BY4741)RNA,并以其 β-actin作为内参基因,利用qPCR检测RIP富集SF2蛋白相互作用RNA的效率.结果显示,0.1%甲醛交联RIP技术特异性捕获得到SF2蛋白-RNA复合物;qPCR技术检测阳性基因PABP、Srsf1在SF2抗体捕获的产物和IgG抗体的产物中相应RNA的浓度差异均在60倍以上.利用qPCR技术,以外源酿酒酵母(BY4741)RNA作为内参,能快速、准确定量检测RNA的富集效率.