酿酒酵母进级进化过程中的基因丢失现象初探

酿酒酵母进级进化过程中的基因丢失问题很少被研究.利用现有的蛋白质数据库,通过设定判断标准,预期可以获得更多这方面的案例以便进行相关问题的研究.利用SMART蛋白质域家族数据库,根据在已完成测序的7种真核生物蛋白质域家族成员中存在或不存在酿酒酵母蛋白质域信号,判断是否发生了基因丢失.通过这种方法,共有6个酿酒酵母基因判断为在进级进化过程中发生了丢失,还探讨了这些基因发生丢失的可能机制.
将表达酿酒酵母3-磷酸甘油脱氢酶基因(GPD1)和3-磷酸甘油酯酶基因(HOR2)的质粒PSE-gpd1-hor2转化到甘油激酶基因(glpK)和甘油脱氢酶基因(gldA)双缺失的大肠杆菌JM109C中,构建产甘油的工程菌JM109C/PSE-gpd1-hor2.接种JM109C/pSE-gpd1-hor2和Klebsiella在含1%葡萄糖的摇瓶发酵培养基中37℃发酵56 h,1,3-丙二醇的最高产量为1.28 g/L,葡萄糖摩尔转化率为37.5%;在30 L发酵罐中发酵68 h,1,3-丙二醇的最高产量为24.09 g/L,葡萄糖摩尔转化率为38.0%;5 g/L的乙酸、乳酸,10 g/L的乙醇分别使1,3-丙二醇的产量降低了91.41%、54.68%和51.56%.
本发明的一种果味白酒的快速制作方法，包括以下步骤：将水果经过清洗后沥水；将硅藻土加入酒精度为30%~75%的白酒中，硅藻土与白酒的配置比例是1:1000~3:1000，搅拌混匀后，放置30~60分钟，除渣、过滤，得到白酒原液；将清洗后的水果加入白酒原液中，水果与白酒原液的配置比例是1:3~1:10；将白酒原液与水果加入搅拌机中，通过搅拌机对水果进行压碎搅拌；将搅拌后的产物加入过滤机，进行除渣、过滤，得到果味白酒原液；将果味白酒原液通过高温瞬时杀菌机进行杀菌处理，得到果味白酒；采用上述方法后，本发明具有以下优点：通过水果与白酒搅拌混合，可以调节和改善白酒的味道、浓度和色泽，适合不同饮酒者的口味，而且不含任何添加剂，所得的白酒为纯天然食品，含水果果香，具有环保和无机产品的特征，这样的制作方法需要时间短，并且可以大批量的生产，满足市场的需求。
本发明公开了一种测定白酒中100种农药残留量的方法，包括白酒样品经减压蒸馏除醇，有机溶剂提取，分散固相萃取净化，离心后用配置有程序升温进样口的气相色谱?三重四级杆串联质谱(GC?MS/MS)测定白酒中的农药残留量。本方法能有效避免白酒中乙醇对质谱的干扰，具有操作简便、快捷、溶剂用量少、准确、灵敏等特点。
以甲醛为交联剂,将胱氨酸修饰到啤酒酵母菌(SC)上,并采用海藻酸钠和明胶固定化,得到一种新型的生物吸附剂——修饰啤酒酵母菌( MSC).通过红外光谱(IR)分别表征了两种吸附剂的结构,考察了其吸附铀的主要影响因素即溶液pH值、吸附时间等.结果表明:MSC细胞表面具有大量吸附铀的基团,MSC和SC吸附铀的最佳条件是:pH值为6.0,吸附时间分别为1.8、1.5h.对吸附动力学模型和吸附等温模型进行了分析,MSC和SC对铀的吸附动力学模型较好地符合了准二级动力学模型,MSC和SC的相关系数均大于0.99;吸附等温线均能符合Langmuir和Freundlich等温线模型,说明该吸附体系是一个单层覆盖与多层吸附相结合的吸附模式,且MSC的最大吸附量是SC的6.5倍.
猪表皮生长因子(Porcine epidermal growth factor,pEGF)能够刺激小肠DNA合成及细胞增殖,促进肠道发育,从而提高断奶仔猪生产性能及免疫功能等.由此,研发分泌表达猪表皮生长因子的益生菌,用于畜牧生产及临床医学具有重要意义.克隆内江猪乳腺组织EGF及酿酒酵母中分泌信号肽Mfα,在综合考虑酿酒酵母密码子使用频率和表达效率的基础上,人工合成优化后的内江猪EGF基因(Synthetic porcine epidermal growth factor,spEGF),构建pYES2-Mfα-spEGF表达载体并在酿酒酵母中成功表达.该重组酿酒酵母INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)表达蛋白spEGF进行Tricine-SDS-PAGE电泳、蛋白质免疫印迹、体外生物学活性检测及断奶SD大鼠体内生物学活性检测.根据RT-PCR和测序结果显示,成功地构建了pYES2-Mfα-spEGF表达载体并在酿酒酵母中实现表达;在Tricine-SDS-PAGE电泳及蛋白质免疫印迹中可以分别观察到目的条带及印迹条带;体外生物学活性检测结果显示,INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)表达蛋白spEGF对肠上皮细胞具有明显增殖作用(P＜0.05);断奶SD大鼠体内生物学活性检测结果表明,重组酿酒酵母组INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)能促进小肠发育(如绒毛高度、隐窝深度、小肠黏膜总蛋白、总DNA及RNA含量等)(P＜0.05),显著提高其生产性能(如体重、日增重、采食量及饲料转化率)及免疫功能(如IgA、IgG及IgM)等(P＜0.05).本研究成功构建的INVSc1(pYES2-Mfα-spEGF)菌液上清中目的蛋白的表达量约为30 mg·L-1,且具有高生物学活性,可以直接用于畜牧生产及临床医学.